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周质蛋白含量很高，但SDS-PAGE电泳检测却没有目的蛋白？？？？

作者 charles08: 来源: 小木虫 450 9 举报帖子

我的实验是目的基因在周质蛋白的表达，用渗透压休克法得到了周质粗蛋白溶液，测粗蛋白280有较为明显的含量：

对照组BL21空菌处理的周质蛋白含量0.08左右，各转化子蛋白在4-5mg/ml.----------------按说这个含量应该说明蛋白在周质表达很明显啦，但是问题来

了，电泳跑胶出来看不到目的条带，不知是什么原因，请大家帮忙分析分析！！！返回小木虫查看更多

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精华评论

lao-nan-hai

有目标蛋白，没分离出来；没我目标蛋白，没表达
charles08

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2楼: Originally posted by lao-nan-hai at 2017-11-11 12:20:50
有目标蛋白，没分离出来；没我目标蛋白，没表达

什么意思，sorry!"有目标蛋白，没分离出来；没我目标蛋白，没表达
"
snoopytbw

你用蛋白含量标定是否表达，显然是不正确的，细菌生长过程蛋白含量也在飙升，做个阴性对照吧。SDS没跑出来就说明没表达
charles08

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4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-13 09:01:00
你用蛋白含量标定是否表达，显然是不正确的，细菌生长过程蛋白含量也在飙升，做个阴性对照吧。SDS没跑出来就说明没表达

对照组BL21即为阴性对照可以说明问题吗？测得它的粗蛋白与样品差异明显；另外，有个阳性对照的样品是有目的条带的
snoopytbw

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5楼: Originally posted by charles08 at 2017-11-15 02:02:42
对照组BL21即为阴性对照可以说明问题吗？测得它的粗蛋白与样品差异明显；另外，有个阳性对照的样品是有目的条带的...

我觉得还是以page为准吧,蛋白含量这个很粗糙了,你想啊,微生物培养过程的阶段很难掌控的,不同阶段差一点点蛋白含量组分就差别很大的
，
charles08

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6楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-15 11:55:07
我觉得还是以page为准吧,蛋白含量这个很粗糙了,你想啊,微生物培养过程的阶段很难掌控的,不同阶段差一点点蛋白含量组分就差别很大的.....

我现在在做浓缩纯化了，看看有无表达的情况
snoopytbw

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7楼: Originally posted by charles08 at 2017-11-19 07:14:37
我现在在做浓缩纯化了，看看有无表达的情况...

其实你可以做下his标签的WB验证，简单直观