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周质蛋白含量很高,但SDS-PAGE电泳检测却没有目的蛋白????

作者 charles08
来源: 小木虫 450 9 举报帖子
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我的实验是目的基因在周质蛋白的表达,用渗透压休克法得到了周质粗蛋白溶液,测粗蛋白280有较为明显的含量:

         对照组BL21空菌处理的周质蛋白含量0.08左右,各转化子蛋白在4-5mg/ml.----------------按说这个含量应该说明蛋白在周质表达很明显啦,但是问题来

了,电泳跑胶出来看不到目的条带,不知是什么原因,请大家帮忙分析分析!!! 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • lao-nan-hai

    有目标蛋白,没分离出来;没我目标蛋白,没表达

  • charles08

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by lao-nan-hai at 2017-11-11 12:20:50
    有目标蛋白,没分离出来;没我目标蛋白,没表达

    什么意思,sorry!"有目标蛋白,没分离出来;没我目标蛋白,没表达
    "

  • snoopytbw

    你用蛋白含量标定是否表达,显然是不正确的,细菌生长过程蛋白含量也在飙升,做个阴性对照吧。SDS没跑出来就说明没表达

  • charles08

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-13 09:01:00
    你用蛋白含量标定是否表达,显然是不正确的,细菌生长过程蛋白含量也在飙升,做个阴性对照吧。SDS没跑出来就说明没表达

    对照组BL21即为阴性对照可以说明问题吗?测得它的粗蛋白与样品差异明显;另外,有个阳性对照的样品是有目的条带的

  • snoopytbw

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by charles08 at 2017-11-15 02:02:42
    对照组BL21即为阴性对照可以说明问题吗?测得它的粗蛋白与样品差异明显;另外,有个阳性对照的样品是有目的条带的...

    我觉得还是以page为准吧,蛋白含量这个很粗糙了,你想啊,微生物培养过程的阶段很难掌控的,不同阶段差一点点蛋白含量组分就差别很大的

  • charles08

    引用回帖:
    6楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-15 11:55:07
    我觉得还是以page为准吧,蛋白含量这个很粗糙了,你想啊,微生物培养过程的阶段很难掌控的,不同阶段差一点点蛋白含量组分就差别很大的.....

    我现在在做浓缩纯化了,看看有无表达的情况

  • snoopytbw

    引用回帖:
    7楼: Originally posted by charles08 at 2017-11-19 07:14:37
    我现在在做浓缩纯化了,看看有无表达的情况...

    其实你可以做下his标签的WB验证,简单直观

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