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啊啊啊 酵母PCR求助!!!

研一实验小白最近在做这个 目的基因(大概700bp)在酵母里面 想提出来扩增 然后连上T载体 用下面方法提的基因组:
挑菌落在EP管里,加500微升pH 7.0的柠檬酸buffer悬浮,10000r/1min,去上清,再加200微升ddH2O悬浮,在沸水中煮15min,再离心,去上清液为模版PCR.
我用上清液跑过一次胶 跑出来是这样(图1)很亮的一坨全部挤在很小的bp...这样对吗?
然后PCR 10微升的体系 程序常规 就跑不出来(图2),有时很淡很淡 引物二聚体很亮 。好几天了 不知道怎么办 求各位大神帮忙!!!!

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用户评论

提取方法感觉有问题

2楼: Originally posted by Yxijaier at 2017-11-10 10:59:21
提取方法感觉有问题
啊啊 那请问一下怎么优化一下,

楼主太折腾了,直接挑点菌体做模板,直接PCR就行了。

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