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以提取的基因组为模板,使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR无果,求助各位大神

筛选到一株含有目的酶的菌株,使用NCBI查找到目的酶的基因,以提取的基因组为模板,使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR均未果。期间重新设计过引物,进行过梯度PCR但都没有结果,且每次跑胶结果都特别干净,没有任何条带。实验新手一枚,现在请问各位大神有没有遇到过这种情况?是不是可以用Taq酶进行一下PCR,但我是要PCR获得目的基因送测序,怕Taq酶保真性不高有突变。希望大家可以给出一些建议,一些我可以继续的尝试,谢谢大家了!  返回小木虫查看更多

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用户评论

基因组用纯水稀释10或100倍试试,基因组中残留酚氯仿影响pcr

primerstar扩增不出来,是因为它具有将你的引物或者模板讲解的 可能性,而普通的Taq酶没有, 所以Taq酶能扩出来的,primerstar不一定能扩出来,而热启动Taq聚合酶扩增性能很好,不会出现primerstar的 情况而且大于普通酶的 灵敏度和特异性,值得 一试。如果扩增片段大于15kb的话,推荐长扩增聚合酶,下游实验对精确度要求很高的话,建议使用 具有 保真性的高保真酶。

2楼: Originally posted by flhua at 2017-10-09 21:09:06
基因组用纯水稀释10或100倍试试,基因组中残留酚氯仿影响pcr
好的,谢谢建议,明天试试

3楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-10-09 21:17:05
primerstar扩增不出来,是因为它具有将你的引物或者模板讲解的 可能性,而普通的Taq酶没有, 所以Taq酶能扩出来的,primerstar不一定能扩出来,而热启动Taq聚合酶扩增性能很好,不会出现primerstar的 情况而且大于普 ...
谢谢,请问primerstar可以将引物或是模板降解还是第一次听说,可以具体解释一下吗,万分感谢;会试一试用taq酶进行PCR,日后有问题还请多多指教,谢谢!:hand:,

先用taq酶扩增试试,primerStar对模板要求比较高……

我也有一段目的基因,用基因组作为模板怎么都行不通,换了好多引物都不行。相同基因其他位点都p出来了。
楼主最后解决了没?

2楼: Originally posted by flhua at 2017-10-09 21:09:06
基因组用纯水稀释10或100倍试试,基因组中残留酚氯仿影响pcr
这问题我也遇到过,稀释之后确实扩出来了

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