PCR后测序,blast最高匹配度只有32%
PCR后电泳跑出了特异性的单带,PCR产物再次用原引物PCR,提高产物浓度,测序。
以下是测序公司返回的结果:
引物 现象判别 可能原因 建议方案
引物1: 测序无信号 重新提供样品
引物2: 测序结果出现套峰 样品存在片段大小相近的非特异性扩增,而琼脂糖回收无法分离这样的片段所致 优化反应条件重新提供样品测序
根据测序公司给出的测序结果,在NCBI上比对,只有后200bp左右有匹配(产物840bp),且匹配度只有76%左右。
疑问1:常见菌的基因全序列在Genebank上是否都有登录呢,如果是这样的话,扩增出得任意一段序列,在测序结果没有问题的情况下,是否都能够比对出结果呀?
疑问2:测序无信号,通常是什么原因导致的呢?
疑问3:电泳显示出特异性的单带,而且用的是HS Taq,高特异性聚合酶,测序结果为何出现严重套峰?是否应解释为有两条长度相同,引物相同的片段呢?这个可能几率有多大呢?
新手上路,总是遇到各种各样诡异的结果,还望各位不吝赐教。 返回小木虫查看更多
今日热帖
不要去比对了,引物1无产物,引物2有套峰,这样的测序结果不可信,你比对的结果没有任何作用。只能重新测
十分的支持楼上的建议
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测序的结果是套峰,那么只能重做,它给的结果自然不能用了。而无信号的话,建议刚做的话可以将产物克隆后在送出去测