本人正用大孔树脂分离色素,分别用水,25%乙醇,50%乙醇,75%乙醇洗脱,最后想用无水乙醇将柱子洗干净,洗了两天了,仍然洗不净,洗脱液在紫外区的吸收峰大小基本不变,请问我应该怎么处理呢? 还有一个问题,关于洗脱剂什么时候换,有人说当流出液的成分基本不变时,就可以换了,为什么不是等这个成分洗脱到差不多完全了再换呢? 返回小木虫查看更多
无水乙醇洗不干净
试试用低浓度的酸或碱洗洗,主要看你的目标产物的酸碱性。然后在用蒸馏水冲洗至中性,再进行下一步。
先用碱水冲,然后用酸水冲,最后用水冲至中性
单看柱子的颜色有时候是不准的!有的看上去没事,用氢氧化钠一冲,黑色的哗哗的下来啊!不知道你用氢氧化钠冲了没有? 换梯度的时间可以根据柱子上色谱带的颜色分段收集,或者一个梯度下流出液没颜色了就换下个梯度,同时做TLC跟踪。
无水乙醇洗不干净
试试用低浓度的酸或碱洗洗,主要看你的目标产物的酸碱性。然后在用蒸馏水冲洗至中性,再进行下一步。
先用碱水冲,然后用酸水冲,最后用水冲至中性
HCl 和 NaOH 行不行,多大浓度比较好啊?
可以的。先用HCl浸泡2-4个小时,再用3倍体积的冲柱,浓度可选2%-3%,水洗至中性。
接着NaOH浸泡2-4小时,再用3倍体积的冲柱,浓度选5%,水洗至中性
酸碱冲柱有时候也不一定3倍体积,视流出液而定,我一般冲到基本无色 为止,也可以不浸泡,直接多几个保留体积冲柱。
后用乙醇洗2-3个被体积,乙醇洗的时候建议中间设两个缓冲的浓度,不然会有气泡产生。
最后用水洗洗去乙醇备用。
看上去很是麻烦,我处理了一天多的时间。但效果会很好的
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多谢多谢,呵呵,我看文献说要是柱子颜色变深就用酸碱冲洗,但是我的柱子现在也没有颜色,怎么知道洗干净了呢?
单看柱子的颜色有时候是不准的!有的看上去没事,用氢氧化钠一冲,黑色的哗哗的下来啊!不知道你用氢氧化钠冲了没有?
换梯度的时间可以根据柱子上色谱带的颜色分段收集,或者一个梯度下流出液没颜色了就换下个梯度,同时做TLC跟踪。