10%SDS-PAGE分离胶配置后不凝固
如题
今天配置20ml10%SDS-PAGE分离胶时多次失败,配置好之后不凝固。
配方如下(单位ml)
H2O 7.9
30%Acr-Bis 6.7
1.5M Tris-HCl(pH=8.8) 5.0
10%SDS 0.2
10%APS 0.2
TEMED 0.008
APS已重配过,但依然无法凝固。SDS曾放入50℃恒温箱,TEMED一直放于4℃冰箱。
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如题
今天配置20ml10%SDS-PAGE分离胶时多次失败,配置好之后不凝固。
配方如下(单位ml)
H2O 7.9
30%Acr-Bis 6.7
1.5M Tris-HCl(pH=8.8) 5.0
10%SDS 0.2
10%APS 0.2
TEMED 0.008
APS已重配过,但依然无法凝固。SDS曾放入50℃恒温箱,TEMED一直放于4℃冰箱。
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最好买液体AP,粉末状容易变质
sds重新配吧,我一般配不凝固,大多是ph8.8的tris hcl出了问题,可以去别的实验室借几毫升回来试试,看看怎么样。粉末的aps储存在4℃是没问题的。
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直接加ap粉末或者加大tmed的量在试一下,5min内不凝固,多半是缓冲液的问题了。
AP和TEMED是胶凝固的关键,可以考虑放在37度试试,那样会凝得快点
APS和TEMED是促凝剂,肯定和这俩有关,APS易失效,固体APS如果吸水就不可以使用了
temed可以多加,20ml的胶,8ul太少了。楼主一般凝多久啊?我一般最少凝一个小时,没事会凝两三个小时