T4酶连接试验总是失败
做T4酶连接试验总是失败，连接完之后转化到DH5α中，最后做菌液PCR总是有很多杂带，请问这是啥原因，有啥改进的方法么，请各位大神指点呀
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可能连接有问题，也可能是转化的问题
请问有啥改进的办法吗
，
我也遇到好多次 t4这种克隆方法确实会出很多问题 ，后来我用无缝克隆了 我感觉t4这种方法早晚会被淘汰的
非特异性条带或者是实验过程中污染到其他的DNA，非特异性条带可能是insert本身的问题，如果是实验过程中污染到其他的insert，就要注意实验条件了！
T4连接要注意载体和片段的摩尔比，转化，还有细胞承受能力吧，感觉这个有时有点运气的成分在里面。。。。
如果实验室使用T4 连接克隆基因的成功案列太少，完全可以换成现在的无缝连接。