利用gateway载体做RNAi和overexpression出现的问题，懂质粒构造的进！！！
大家好，我现在想通过gateway技术构建一种基因的RNAi和Overexpression表达载体。Destination plasmid是从国外购买的，这两种载体的图谱如下。
我已经将目的基因通过带有attB1和attB2位点的引物克隆得到了。BP反应和LR反应已经做完了，依据致死基因和T-DNA外面链霉素抗性以及酶切验证，三个把关，我感觉目的基因已经导入到正确位置了。
现在的问题是，我将纯化好的质粒想导入发根农杆菌中，选择了A4（带有利福平抗性）和AT15834野生型（无任何抗生素抗性）两种菌株。可是怎么也筛不到阳性克隆，要么是污染，要么是什么都不长！我用的是链霉素（100ug/ml）和利福平（50ug/ml）平板，不知道是不是链霉素抗性基因不能在农杆菌中表达啊？卡那抗性能在农杆菌中表达吗？内含子之间的CmR又是在哪里表达的呢？我查了文献，但是还是一头雾水。关键是，有没有一种方法，可以从基因序列直接推理出它在某种菌内的表达情况？？
overexpression用
RNAi用，内含子之间有一cat基因，LB RB之间有一kana抗性基因。
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顶你 美女博士 虽然俺不懂 祝福你更快得到应助
这位美女博士我也要买载体？能把买载体的方式或链接给我吗？在下感激不尽！
不好意思，回复晚了。这些载体是从国外买的，给你一个网址哈：http://gateway.psb.ugent.be/search
，
好的，谢谢
首选你的entry vector是什么抗性？其次你的基因放到entry vector以后测序了没有？你的能不能直接做LR reaction？
表达情况是什么意思？一般只要启动子合适就可以表达的，kan抗性一般是可以在农杆菌中表达的，你构建的质粒测序验证过了吗，用的什么方法转化农杆菌？
entry vector就是pDNOR221，kana抗性。没有测序。可以直接做LR反应的。关键我的问题不是这个。你答非所问，所以不能给你金币。谢谢你的应助帖