qPCR 我扩增的溶解曲线非S形,不知道是什么原因?求助!谢谢!!! 图片jpg.png 返回小木虫查看更多
1. 建议跑一下电泳看一下目的条带亮度和完整性,这样的情况一般浓度是比较低,扩增效率低的结果,如果是这样的话建议增加产物浓度,减少引物量(如0.2uM each),可以增加引物特异性,当然检查试剂盒的情况,是否按照说明书去做,或者换一个扩增效率更高的试剂盒 2.如果量少,产物里阻碍物比较多,什么曲线都会产生,前面几张图峰值不是很高的那几个只是将原始的曲线放大了而已,相较于正常的溶解曲线可以忽略不计 3.检查模板来源,提取的时候浓度、完整性、污染情况,
就没有进入对数期,扩增效率有问题,优化体系吧
没有进入平台期 你看看模板浓度和扩增效率 设计引物一定要看看扩增效率
1. 建议跑一下电泳看一下目的条带亮度和完整性,这样的情况一般浓度是比较低,扩增效率低的结果,如果是这样的话建议增加产物浓度,减少引物量(如0.2uM each),可以增加引物特异性,当然检查试剂盒的情况,是否按照说明书去做,或者换一个扩增效率更高的试剂盒
2.如果量少,产物里阻碍物比较多,什么曲线都会产生,前面几张图峰值不是很高的那几个只是将原始的曲线放大了而已,相较于正常的溶解曲线可以忽略不计
3.检查模板来源,提取的时候浓度、完整性、污染情况,
就没有进入对数期,扩增效率有问题,优化体系吧
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