植物蛋白提取及酶活测定中遇到的若干问题
事情是这样的,因为需要测定CAT,SOD活性等其他实验,我需要提取植物蛋白:
我取了新鲜的植株(绿色植物小苗),用液氮磨碎后,加入蛋白提取液(试剂盒),混匀(我用了下涡旋机20秒左右),冰上孵育20——30分钟。然后16000转4度离心20分钟。
结果我的上清是一种棕褐色的液体,这是正常的么?不是应该差不多是浅浅的绿色?
由于一些原因我没能当时就测酶活,而是等了一个半小时。担心酶活性受到影响,我把我的样品放在了冰上(0度左右)。在测酶活之前放置室温环境(大概20度左右。结果测酶活的时候发现竟然几乎没有变化。而且我的样品在波长270 nm左右有较强的吸收,所以应该是这个影响了我酶活的测定。
所以,请问这种状况怎么破?我是哪里做的有问题么?求解答困惑~~~
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有木有人可以帮忙解答一下~~~
这两天我带着师弟师妹也在测定这个几个酶的活性,我们用的是磷酸缓冲液进行研磨。可溶性蛋白的提取方法和酶提取方法一致,然后用考马斯亮蓝测蛋白含量。SOD,POD,CAT的测定也都没什么问题。
我测的植物叶片,按道理来说上清应该是绿色的,我的却是棕褐色,不知道是出了什么问题~~~
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谢谢,我提的是植物叶片的蛋白,蛋白提取液和你这个都不太一样~还是解决不了我的问题~