当前位置: 首页 > 生物科学 >【求助/交流】普通PCR和荧光实时定量PCR为何结果不同?

【求助/交流】普通PCR和荧光实时定量PCR为何结果不同?

作者 晓夜
来源: 小木虫 200 4 举报帖子
+关注

我要检测一个基因在牛卵不同时期的表达情况,可以分为1,2,3,4,5共5个时期,但是普通PCR后电泳,结果是1,2没有条带,3,4,5都有较明显的条带。荧光实时定量PCR后,分析出的柱状图显示第5个时期表达量最小,其他1,2,3,4都比5的表达量高,这是为什么呢???另外,我把荧光实时定量PCR后的产物电泳,结果是1,2,3,4,5时期都有170bp的条带(荧光实时定量的产物为170bp),跟柱状图结果应该一直。 但是普通PCR明明是1,2没有目的条带啊!
注:我检测的基因片段为540,普通PCR扩增的是整个基因540bp,而荧光定量扩的该基因其中一段170bp,荧光定量引物没有问题(已验证)
求高人指点一二啊,本人不胜感激。谢谢!!! 返回小木虫查看更多

今日热帖
  • 精华评论
  • 三磷酸腺苷

    首先做定量有没有用内参校正?
    其次,普通PCR你的模板是什么?gDNA还是cDNA?
    第三,普通PCR的循环数是多少?

  • 晓夜

    内参校正不太明白,我用的是CDNA,实时定量和普通PCR都是40个循环。

  • 晓夜

    引用回帖:
    Originally posted by 晓夜 at 2010-12-19 09:24:05:
    我要检测一个基因在牛卵不同时期的表达情况,可以分为1,2,3,4,5共5个时期,但是普通PCR后电泳,结果是1,2没有条带,3,4,5都有较明显的条带。荧光实时定量PCR后,分析出的柱状图显示第5个时期表达量最小,其 ...

    内参校正不太明白,我用的是CDNA,实时定量和普通PCR都是40个循环。
    本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2714927&pid=1164641&page=1#pid1164641

  • 三磷酸腺苷

    看来你还没明白实时定量和半定量的原理啊~~
    怎么从头开始讲好=v=

    要不这样,你去查以下几个问题

    1、内参的作用
    2、为何终点法定量不准
    3、半定量PCR为何要严格控制循环数

猜你喜欢
下载小木虫APP
与700万科研达人随时交流
  • 二维码
  • IOS
  • 安卓