【求助/交流】普通PCR和荧光实时定量PCR为何结果不同?
我要检测一个基因在牛卵不同时期的表达情况,可以分为1,2,3,4,5共5个时期,但是普通PCR后电泳,结果是1,2没有条带,3,4,5都有较明显的条带。荧光实时定量PCR后,分析出的柱状图显示第5个时期表达量最小,其他1,2,3,4都比5的表达量高,这是为什么呢???另外,我把荧光实时定量PCR后的产物电泳,结果是1,2,3,4,5时期都有170bp的条带(荧光实时定量的产物为170bp),跟柱状图结果应该一直。 但是普通PCR明明是1,2没有目的条带啊!
注:我检测的基因片段为540,普通PCR扩增的是整个基因540bp,而荧光定量扩的该基因其中一段170bp,荧光定量引物没有问题(已验证)
求高人指点一二啊,本人不胜感激。谢谢!!! 返回小木虫查看更多
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首先做定量有没有用内参校正?
其次,普通PCR你的模板是什么?gDNA还是cDNA?
第三,普通PCR的循环数是多少?
内参校正不太明白,我用的是CDNA,实时定量和普通PCR都是40个循环。
内参校正不太明白,我用的是CDNA,实时定量和普通PCR都是40个循环。
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看来你还没明白实时定量和半定量的原理啊~~
怎么从头开始讲好=v=
要不这样,你去查以下几个问题
1、内参的作用
2、为何终点法定量不准
3、半定量PCR为何要严格控制循环数