【求助/交流】pcr问题求助
请问谁p过真菌的ITS?
小半年了,一直p都没p出来,ITS应该是很保守的序列,我p的是尖孢镰刀菌的。
我用的引物是:
ITS4:TCC TCC gCT TAT TgA TAT gC Tm:55.75
ITS5:ggA Agg TAA AAg TCA Agg Tm:52.74
我的体系是:20
双蒸水:12
10*buffer:2
镁离子:1.5
dNTP:1
P1:1
P2:1
模版:1
Taq酶:0.5
程序:94度5min,94度30s,44度45s,72度1min(30 cycle) 72度10min 4度保存。
请指教,不胜感激 返回小木虫查看更多
今日热帖
这么低的退火温度还P不出来,会不会是模板的原因?引物酶问题吧?
实验室师兄用相同的体系,药品,引物,程序p出来过,模版DNA条带很亮。
20ul 体系一般模板 酶 引物都加0.4微升啊~我是这样的体系!退火温度低,一般都在50以上!
72度延伸1min是不是有点短啊
不懂,顶下~~~
你dNTP浓度是多大的?如果是10mM的,你就加的有点多了。
退火温度太低了,我做的时候用的50度,楼主各成分的添加量都有点大,模板的浓度很重要,如果模板浓度大的话,那你添加这些就太多了,