我最近在做一种未知菌的16SRDNA的PCR,一直没做出来,大家帮我看一下到底是哪里出现了问题?
        
              PCR体系:
               模板  5uL
               上游引物(2.5uM)  5uL        Tm 57.8
               下游引物(2.5uM)  5uL        Tm61.9              
               Mgcl2(50mM)       3 uL     
               10*PCR  buffer     5uL  
                dNTP (2.5mM )    1uL
               Taq酶(2u/ul)        1uL
               ddH2O                 25uL      

           反应程序:
                        95(5m)
                       
                        95(1m)
                        53(1m)
                        73(2m)

                        72(10m)

                   30个循环.
结果P不出来,并且我也不知道P出来的条带应该是多少bp?大家帮我分析分析吧,只有10个金币全送上.

他们给我的引物合成书上的TM值是:
               上游引物      Tm 57.8
               下游引物     Tm61.9

但是我根据TM=4(G+C)+2(A+T)引物长都为20BP,算出来的
               上游引物      Tm 60
               下游引物     Tm64
所以我的程序退火温度应该是多少呢?53会不会太低了?

[ Last edited by wwsw38 on 2010-4-23 at 21:56 ] 返回小木虫查看更多