关于感受态细胞制备的疑问
一直以来做的感受态细胞转化率都不是很高,现在想问几个问题。我们一直都是用takara的感受态细胞的kit制作的。
在加入solution a和solution b的时候都有一个除尽液体,目的是为了使转化率提高,为什么,我们一般用移液枪吸出来但是不是特别干净,之前用的是滤纸,还有有什么好的方法吗?
还有就是有两个步骤需要离心,然后沉淀要让它悬浮起来接触溶液,试剂盒上面说的是用手指轻轻弹,不能剧烈震荡,这个剧烈的程度是什么,我手指甲都给弹痛了,还是没有浮起来。后面他们都是用枪抽吸混匀的,这样对吗?
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有人有做感受态细胞经验的吗
。。。
1、稍微用手指轻弹即可。
2、对于沉淀部分,用移液枪轻轻吹打混匀,即反复吸打。
感受态制作关键是:
1. 所有操作必须在4°,
2. CaCl2 洗几遍后要让细胞孵育至少1小时在CaCl2中
3. 细菌不要培养到stationary phase,
我们都是自己做的感受态,转化效率挺高的