以基因组为模板做pcr
以链霉菌基因组为模板，然后设计引物，产物长度为1500bp，引物GC含量分别为80%和65.9%，Tm分别为72.8和79.9，采用高保真的酶进行pcr，怎么调整条件做了温度梯度还是没有产物出现，求大神给建议！引物长度分别为20和44，
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京公网安备 11010802022153号
定量PCR的模版既可以使总DNA,也可以是cDNA,但两种做法的用途不同.如果用总DNA做模版,你检测的就是总DNA的拷贝数.如果以cDNA为模版,你检测的就是某个基因的表达水平，
GC含量的问题把，扩的时候加GC buffer 或DMSO+betaine
那就是序列问题了，基因组序列可靠吗
Tm低5℃，TOUCH-DOWN多几个温度条件和（多设计几对）引物P.
推荐你一个酶，NEB的高GC酶，亲测85%GC含量的条带一次成功，模板病毒基因组。