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求助：定量PCR结果无CT值

作者 qiaoqiao1223: 来源: 小木虫 850 17 举报帖子

昨天跑了一次定量，想做标准曲线，但是出来的结果没有CT值。反应模板是线粒体DNA，引物、反应条件等都是经其他实验室测定、摸索过的。
我们把标准样品梯度稀释，只有浓度最高的样品有CT值，30多。
同时一起跑的几个待测样品，也有的有CT值（30多），有的没有。

这种情况是不是说明我们标准样品的浓度太低了？
下一步调整是需要增加样品浓度？还是增加循环次数时间？还是两个都要？或者是因为别的问题？返回小木虫查看更多

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精华评论

stabilized

最好先用PCR试试条件，跑电泳确认能P出条带
yucuiyuan00

一般荧光定量PCR Ct值30多，说明模板浓度比较低，需要提高模板浓度。PCR结束有扩增曲线的话再跑胶确认下片段大小。循环数可以增加到40。
fano8o9sin

应该是模板浓度太低了，一般循环次数设置到40
许彦

样本浓度吧，你有具体的实验扩增曲线图吗
贱贱JMe

没有设置内参吗，简单增加循环次数意义不大，CT过大并不能说明问题
qiaoqiao1223

引用回帖:
6楼: Originally posted by 贱贱JMe at 2017-07-04 16:55:34
没有设置内参吗，简单增加循环次数意义不大，CT过大并不能说明问题

做标准曲线的，好像不用内参吧。。我们没设内参。等明天再换个标准样品，增加循环次数再试一下~
，
qiaoqiao1223

引用回帖:
2楼: Originally posted by stabilized at 2017-07-04 08:46:14
最好先用PCR试试条件，跑电泳确认能P出条带

我们打算换个标准样品，增加以下循环次数再试一下~等结果出来了，如果还没有CT值，就再麻烦大家帮忙分析一下~