首先， 应确定该中间片段在全长中的大概位置，距离5‘端和3’端大概还有多长？
其次，你是否建有全长的race文库？
最后，如果中间片段距离5‘和3’大小合适的话，直接依据中间序列设计完全匹配引物，以RACE文库为模板扩增即可

只要保证3`RACE，5`RACE扩增完后，两都之间有重叠区就可以，再就是注意设计的引物Tm值。

高中学的真是小菜一碟，同情你。为你加油，相信你自己，可以做出来

正好最近也在做，和lz分享一下经验吧。
1、长度大概23-28nt。不用太长，没啥用。
2、高tm，尽量tm值高于65度，能上70也行，便于后边使用降落PCR。
3、gc含量尽量接近50或更高。
4、推荐使用pp5和oligo6，前者搜索，后者检测，虽然tm值相差会很大（pp5计算方法不如oligo精细），但无伤大雅。
5、也可手动设计，就是单用oligo，寻找tm较高的区域，手动调整。
6、如果片段较短，建议先进行3’，相对简单。之后得到3‘片段了，再在拼接起来的长片段上设计5’GSP。原因是5‘一般用试剂盒，对引物要求较高，尤其是用TAKARA的，如果引物设计不好，就是烧钱，片段长点，引物设计的选择余地就大。
望对lz有用！