通过RT-PCR 获得了一段保守序列 接着如何设计RACE引物
如题
我要做的是一个未知基因, 依据已知物种的 对比设计出了引物,做了RT-PCR获得了大约500bp的片段,现在要获得全长,做RACE。
kit 中说设计3‘和5’引物各为sense 和antisense 引物,我现在又个很纠结的问题,一般测序结果的序列是正链还是负链呢? 怎么知道测序结果是从5‘到3’ 还是从3‘到5’呢?然后怎么设计引物?
P.S.
我的电脑装的是win7 32位的,可以装PP5吗? 装了个PP6好像不好用
我是RACE新手 请教各位大虾!!! 返回小木虫查看更多
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我最经也要做RACE,但也是新手呀,刚刚看了下3‘和5’RACE的原理和步骤,算是懂一点了,但不知道到时实验做起来会怎么样,祝我俩好运吧!
那请问你的引物是如何设计的呢?一般测序结果的序列是正链还是负链呢?我很想知道这个问题的答案 谢谢
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怎么没有人回复呢 是问题太低级吗
公司测序回来的结果都是由5‘到3’端的,你在设计3‘端和5’端的时候需要设计两个特异引物,做巢式PCR。3’端正向,5‘端为反向互补,满足引物设计原则就可以了
我跟lz也要做相同的东西,纯新手,希望以后交流。。。
就是根据模板链设计的啊,测序结果都是正链,5‘到3’的!
我用的是 PCR产物结果直接去测序的 也是5‘到3’吗?