PCR扩增结果出现逐级叠加累积,做成单克隆依然如此!是何原因?
请大神赐教!
最近做PCR,拿的动物肌肉的全基因组进行扩增,出现了逐级递增的PCR条带, DFSZ为四种不同的物种,最后用FF的红框中的条带(约500bp左右)割胶回收,再做成单克隆,拿通用引物M13扩增,结果 仍然出现逐级递增的条带。其中单克隆3没有多条带,最后送样测序的是单克隆的3和6。
测序结果显示除去质粒部分基因,单克隆3含有170左右碱基,而单克隆6测序也能测通(且不含杂峰),含有400左右碱基,有趣的是单克隆6的序列中是含有两个3的序列。
也即再最初的全基因组PCR中推测的自身片段可以累加逐级递增。但单克隆也出现这种结果,该怎么解释?这段基因是能够形成什么特殊的结构才会导致如此吗?
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原贴显示不出来图片啊,补充一下
第一张: http://
第二张: http://,
什么情况?为什么图片一直显示不出来?