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普通PCR产物进行琼脂糖电泳条带竟然是斜的?!有图提供,请大侠指点!

普通PCR产物进行1%的琼脂凝胶电泳,条带竟然是斜的,TAE缓冲液、电泳仪、电泳槽都换过了,还是这样,实在是找不到原因。以前经常做普通PCR,都很正常。最近怎么会出现这样的现象,请大侠们给解答,谢谢 谢谢!
普通PCR产物进行琼脂糖电泳条带竟然是斜的?!有图提供,请大侠指点!
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用户评论

2楼: Originally posted by 雪中蝶舞 at 2017-06-14 00:01:49
好奇怪啊
是的呢,难道是琼脂糖有问题?

3楼: Originally posted by guoguo201209 at 2017-06-14 00:04:19
是的呢,难道是琼脂糖有问题?...
你都说以前做过,应该不会有问题吧?问问有经验的老师呗

我觉得你需要重点关注琼脂糖和缓冲液以及染料

延长琼脂糖煮沸时间,煮沸之后晃动均匀再倒板以及延长胶凝固时间。

把染料换了吧,染料的问题

八成是缓冲液的原因,测下缓冲液的pH,关注跑胶时的温度以及电流是否正常

还有可能是你点样的时候戳到胶了

胶的问题最大,可能是没融化均匀。
其次是电流的问题,样品(电流)偏向同一个方向。如:电极有问题、染料。。。
只能一点点排除了。你可以借一台电泳仪试试。

检查一下较快是不是放斜了,电压是否稳定,是否是电泳仪电路连接出现问题,感觉像是电压不稳呢,飘来飘去

10楼: Originally posted by stabilized at 2017-06-14 10:02:54
胶的问题最大,可能是没融化均匀。
其次是电流的问题,样品(电流)偏向同一个方向。如:电极有问题、染料。。。
只能一点点排除了。你可以借一台电泳仪试试。
谢谢你的回复。配胶的事情我是经常做的,以前也是这样子做的。我下次换个染料试试。

8楼: Originally posted by dehong1573 at 2017-06-14 08:36:36
八成是缓冲液的原因,测下缓冲液的pH,关注跑胶时的温度以及电流是否正常
谢谢 提醒,我回头测一下缓冲液pH值,一般要求pH 为7 吗?

7楼: Originally posted by real-times at 2017-06-14 07:11:14
把染料换了吧,染料的问题
好的,回头试一下

之前做过倾斜  但是因为胶放的偏了  往一个方向斜  ( ????`)

胶没做好,电压别搞太大

估计是胶的问题,因为maker也是斜的。

溶胶不完全就会这样,,是不是琼脂糖  有问题?

我也出现过,我的是燃料的问题。。。

DNAstain有问题

胶不平,没有弄好。在弄一次,对注意。如果还是这样找找别的原因

1. buffer 的问题大。重新配制。2. gel 也注意一下。

胶没有煮好,还有颗粒状,增加沸腾时间,混匀

更换新的电泳缓冲液

Marker也跑的有问题,可能胶没有做好,用0.5%的TAE做胶跑胶,电压也不要太高了,低电压跑时间长点,祝好

缓冲液要换了

观察一下胶的孔是不是斜的

19楼: Originally posted by wanglixia815 at 2017-06-15 20:33:00
我也出现过,我的是燃料的问题。。。
染料出问题是什么原因呢,最近做pcr产物酶切,酶切后电泳就是这样,但是不是酶切的没有问题,都不知道为什么?如果知道帮忙回答一下

各种原因都可能。
1. 胶本身的原因。就是胶制作的不均匀 (配液时融解的不彻底,或不纯--里面有杂质)--建议重新配一块
2. 胶的制作问题,听过有人误用ddH2O 代替了缓冲液去配胶,也会这样(你自己排出一下)
3..电泳胶的浓度不适合 (大部分情况下。0.8-1%的都适用。但你没有提你的DNA时多大的)。
4. 回收的缓冲液 (TAE 反复使用,可能会引起这样的问题。你说你已经换了,可以排除)
4. 电泳槽有问题 (有的地方链接不好,造成通电不均匀)
5. 温度过高。TAE 对高温度很敏感,温度过高 或 run的时间过长, 也可能是一个原因。
6.电压: 电压过大. 一般情况下,100V/30分,适合大部分DNA片段。 但你试一下把电压降到50-60V,跑时间长一点。
7.其他
总而言之,建议重新配TAE、胶,将电压降至60以下,再试一次。
祝你顺利。

虽然感觉你们说的我不太懂,我们课上做过电泳实验,当时老师缓冲液加少了,没没过琼脂,最后实验结束,就是斜的。

很有可能是胶不均匀。一可能没溶解完全,二可能没摇匀。前者可能性更大。

向各位大侠说一下情况:同样的琼脂糖、染料、缓冲液、buffer、电泳仪、电泳槽,别人做条带就是直的,现在的唯一区别就是,她用的是小板,我用的是大板子。至于琼脂糖融化的问题,我是老做PCR电泳的,想不会出现这个问题。近期再做做改进,找出原因和大家说啊!!头大!!

胶没融好吧~

36楼: Originally posted by 木子李2015 at 2017-06-21 11:32:39
胶没融好吧~
没看到楼主回复,当我没说吧

6楼: Originally posted by 香蕉芒果99 at 2017-06-14 06:41:43
延长琼脂糖煮沸时间,煮沸之后晃动均匀再倒板以及延长胶凝固时间。
楼上大侠,你真赞!,条带变斜,好像就是胶煮的时间不够。

我也觉得是琼脂糖的问题

哈哈,好看

很明显,凝胶不均匀。建议重新制备新的凝胶再去尝试

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