请教一下连接与转化问题！
各位大侠你们好！我想请教一下一个问题，我现在做的是串联表达，我是先分别扩增两段长度一样的串联片段，并且串联片段的序列都是重复的，然后我在这两段串联片段设计一个相同的限制性内切酶，目的是通过这个酶把这两段串联的片段连接起来，这样的话，我串联的长度就延长了，我现在时扩增的两段片段也都扩出来了，两段片段的大小都是350bp左右，然后双酶切，第一段片段我用ECORI和Sal I双酶切，第二段我用Sal I和Xhol I双酶切，条带也都有，然后我把这两段双酶切回收的产物和PET-30a（+）载体双酶切【载体用ECORI，Xhol I双酶切回收】这三段我在一个体系里面连接，然后转化，但是最后我挑菌进行pcr鉴定扩出来的条带大小只有350bp多，按说连上应该是680bp多，双酶切鉴定也没有那条目的条带的条带，这样不是说我没连上吗，这样的话我应该怎样改进啊？请各位指导一下！谢谢！我以前做出来的一段串联片段也是按这种方法做的，测序也都正确！
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如果你去测序，就会发现克隆到你的载体中的都是第一个片段（EcoRI+SalI)，原因很简单，salI和XhoI是同粘酶（酶切后产生的粘性末端一样）。改进方法很简单：将XhoI或者SalI合成其他合适的酶就行了
将XhoI或者SalI换成其他合适的酶就行了
请教一下，末端一样就不可能出现第1,2连接后于载体连接的情况么？还是只是这种几率太低，基本做不出来
都忘了同粘酶的定义了，汗，赶紧搜了下：
同粘酶:
识别不同的位点, 但产生相同的粘性末端。
刚看了下，Sal I和Xho I的位点最外面的一个碱基是不一样的啊，这两个就不算同粘酶了吧？
Xho I C|TCGAG
GAGCT|C
Sal I G|TCGAC
CAGCT|G
，
你要再多读几次定义.
Xho I的粘性末端是：TCGAG
Sal I 的粘性末端是： TCGAC
这两个不一样啊。请教啊。
我习惯叫同尾酶,粘末端都是TCGA呀.