我测定酸性磷酸酶时候为什么不显色啊 ? 操作过程和试剂应该都没有问题 是怎么会事儿? 我用的方法是关松荫的方法 ph5的醋酸盐缓冲液,氯代二溴对苯醌亚胺显色剂,标准曲线测定时吸光度都是零 怎么回事儿? 麻烦有经验的学长学姐 老师给指导下 先谢过了!! 返回小木虫查看更多
做标曲有问题吗?
不好意思,上一个回复没注意看到你说的标曲不显色 测酶的话, 反应时的温度是不是也要注意一下 我以前测过这个, 但是反应底物跟你这个不太一样, 是在一定温度下加入底物, 水浴反应一定时间后用碱终止反应, 然后再加显色剂的. 不太了解你这个方法的步骤 [ Last edited by fayfeifei on 2011-10-14 at 05:44 ]
我用的是磷酸苯二钠比色法。称5克土样,再加2.5ml甲苯,轻摇15min,加入20ml0.5%磷酸苯二钠溶液,仔细摇匀后放入恒温箱,37度下培养二十四小时。后于培养液中加入100ml0.3%硫酸铝溶液并过滤。 然后吸取3ml滤液于50ml容量瓶,加5ml醋酸盐缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺,显色(不过没有显色)后定容,测量。
做标曲有问题吗?
不好意思,上一个回复没注意看到你说的标曲不显色
测酶的话, 反应时的温度是不是也要注意一下
我以前测过这个, 但是反应底物跟你这个不太一样, 是在一定温度下加入底物, 水浴反应一定时间后用碱终止反应, 然后再加显色剂的. 不太了解你这个方法的步骤
[ Last edited by fayfeifei on 2011-10-14 at 05:44 ]
我用的是磷酸苯二钠比色法。称5克土样,再加2.5ml甲苯,轻摇15min,加入20ml0.5%磷酸苯二钠溶液,仔细摇匀后放入恒温箱,37度下培养二十四小时。后于培养液中加入100ml0.3%硫酸铝溶液并过滤。 然后吸取3ml滤液于50ml容量瓶,加5ml醋酸盐缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺,显色(不过没有显色)后定容,测量。
你这个是不是用来测试碱式磷酸酶的? 我稍稍查了一下资料, 大多是用磷酸苯二纳法来测碱式的. 你这个反应的pH环境是酸性么? 是不是应该在一开始就加入缓冲液?
我以前做酸式磷酸酶的时候是用的对硝基苯磷酸纳, 不过不是土样, 倒是反应挺快的, 15分钟就行了, 也很简单
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是酸性的,配那个磷酸苯二钠的时候就是用ph5的醋酸盐缓冲溶液配的,关松荫的这个方法说的都可以做,只不过做碱性的磷酸酶的时候缓冲液是碱性的。配好以后做土壤样品提区液的时候加的就是用缓冲液配的磷酸苯二钠
现在是标曲都不显色嘛
那标准溶液本身有没有问题啊?
逐个逐个环节分析可能出错的地方啦
很奇怪 我又在培养箱里放了两天,显色了,肉眼可以看到有颜色梯度,可是在660nm下测定时吸光度一样!前几天测定时都是零,这几天又都一样,我回头在重做一遍看看吧,谢谢你啊。