【求助/交流】PCR问题求助
请教高手一个问题,我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase(红盖子的)(退火温度梯度从45度到65度)都能P出来,而且条带很亮,但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因? 返回小木虫查看更多
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请教高手一个问题,我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase(红盖子的)(退火温度梯度从45度到65度)都能P出来,而且条带很亮,但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因? 返回小木虫查看更多
不同的酶,条件有所不同吧。这种情况我也碰到过,当时是提高了退火温度
普通taq,好像比较容易P出来,高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听
不同的酶条件是不一样,但我用高保真的酶也做了温度梯度,还是P不出来。
其实有时就是这样的情况,所以建议一直用一个公司的一种酶!
高保真的酶有着其特殊性,保真性能高了,PCR效率就会低,同样的条件肯定不行。
我拿Prime Star来说吧,这个我用的多些。
普通的Taq,退火时间一般为30s,但是这个酶就比较特殊,退火时间10s,我扩增3k的片段照样退火10s,这时候如果你用普通程序肯定做不出来。
建议好好研究一下各个酶的说明书,你会有很大收获的,呵呵,好运
我都是按照每个酶的说明书做的,仍然谢谢你
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