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【求助/交流】PCR问题求助

作者 star1987
来源: 小木虫 1350 27 举报帖子
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请教高手一个问题,我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase(红盖子的)(退火温度梯度从45度到65度)都能P出来,而且条带很亮,但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因? 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • sxxuan

    不同的酶,条件有所不同吧。这种情况我也碰到过,当时是提高了退火温度
    普通taq,好像比较容易P出来,高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听

  • star1987

    引用回帖:
    Originally posted by sxxuan at 2010-12-21 16:11:55:
    不同的酶,条件有所不同吧。这种情况我也碰到过,当时是提高了退火温度
    普通taq,好像比较容易P出来,高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听

    不同的酶条件是不一样,但我用高保真的酶也做了温度梯度,还是P不出来。

  • 天使托

    其实有时就是这样的情况,所以建议一直用一个公司的一种酶!

  • yabxxh

    高保真的酶有着其特殊性,保真性能高了,PCR效率就会低,同样的条件肯定不行。
    我拿Prime Star来说吧,这个我用的多些。
    普通的Taq,退火时间一般为30s,但是这个酶就比较特殊,退火时间10s,我扩增3k的片段照样退火10s,这时候如果你用普通程序肯定做不出来。
    建议好好研究一下各个酶的说明书,你会有很大收获的,呵呵,好运

  • star1987

    引用回帖:
    Originally posted by yabxxh at 2010-12-21 16:28:56:
    高保真的酶有着其特殊性,保真性能高了,PCR效率就会低,同样的条件肯定不行。
    我拿Prime Star来说吧,这个我用的多些。
    普通的Taq,退火时间一般为30s,但是这个酶就比较特殊,退火时间10s,我扩增3k的片段照样 ...

    我都是按照每个酶的说明书做的,仍然谢谢你

  • star1987

    继续求助高手来解答!

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