各位大侠们好,请教一个问题,同样的基因,用未纯化的PCR产物和克隆质粒做模板都能P出目的片段,可是用胶回收纯化的PCR产物做模板却P不出来,请问是什么原因?望赐教 返回小木虫查看更多
是不是有可能在胶回收的时候,乙醇没有晾干或者纯化后模板浓度变的太低了?没遇到过这种情况,只是猜测。
最大可能 乙醇残留了。 其次 其他操作失误。
我也遇到过同样的情况,能P出来,但是量很少。 恳请大虾赐教
如果完全没有条带有可能根本就没回收回来,或者回收回来的条带不对,一般纯化回收的样本要稀释后才能够做普通PCR的样本来使用,否则样本浓度太大了,也扩不好的。乙醇残留也会有影响啦。 你中间有酶切的步骤没,看看是不是酶切的时候酶不好,有核算外切酶活性,把末端切掉啦
4楼正解 有可能因为 你的目的片段含量低 片段不亮 回收后都有可能会有损失 导致你回收后什么都没有
是不是有可能在胶回收的时候,乙醇没有晾干或者纯化后模板浓度变的太低了?没遇到过这种情况,只是猜测。
最大可能 乙醇残留了。
其次 其他操作失误。
我也遇到过同样的情况,能P出来,但是量很少。
恳请大虾赐教
如果完全没有条带有可能根本就没回收回来,或者回收回来的条带不对,一般纯化回收的样本要稀释后才能够做普通PCR的样本来使用,否则样本浓度太大了,也扩不好的。乙醇残留也会有影响啦。
你中间有酶切的步骤没,看看是不是酶切的时候酶不好,有核算外切酶活性,把末端切掉啦
4楼正解 有可能因为 你的目的片段含量低 片段不亮 回收后都有可能会有损失
导致你回收后什么都没有
谢谢指教。我的片段是很亮的,而且没有杂带,回收之后的样本也稀释了十倍才做模板的,但是P出来的是弥散带,这么说来,应该是乙醇残留??再次谢谢指教
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