pCAMBIA 1301载体如何构建
想用pCAMBIA1301来构建一个植物瞬时表达载体，借到了一个没有改造过的pCAMBIA1301，百度的图谱和NEBcutter（GenBank: AF234297.1）结果如下：
可是看到这个载体觉得很困惑，为什么有两个CaMV 35S promoter啊？我应该把我的目的序列放哪里才合适啊？直接放完整的CDS序列可以吗？
1301.png
酶切.png
返回小木虫查看更多
今日热帖
猜你喜欢
板块导航
- 网络生活
- 资源共享
- 化学化工
- 专业学科
- 科研生活
- 生物医药
- 材料
- 计算模拟
- 学术交流
- 出国留学
- 注册执考
24小时热帖
换一批
- 下载小木虫APP
- 与700万科研达人随时交流
-
二维码
-
IOS
-
安卓
京公网安备 11010802022153号
两个启动子的方向不一样啊，一个是启动载体基因的表达，一个是启动GUS基因的表达，构进去的片段构在单克隆位点MCS就好了啊
不过，我也好奇为什么没有终止密码子，而且35s 不是强启动子吗？为什么要分别去gus和潮霉素等抗性基因呢？
可是lacZ基因的方向跟MCS不同，而且MCS后面没有转录终止信号啊，很好奇这个载体到底要怎么用
这个载体可以做过表达(插入片段在lacZα，前面有一个lac promoter），以及GUS组织化学染色（CaMV 35S promoter启动的就是该基因的表达）；CaMV 35S promoter (enhanced)是启动潮霉素抗性基因的表达，可以用于农杆菌侵染时的筛选标记。查了一下，用于植物基因超表达，构进MCS的片段是要有起始密码子和终止密码子的CDS。看你要做什么用咯
，
我看了下这个载体的图谱，然后谷歌学术搜索了下。这个载体是提供的MCS位点是给一个完整的转录单元进行插入的，一个完整的转录单元包括启动子，CDS（带终止密码子），终止子。lacZ是用来蓝白斑筛选的。所以，载体现在上面的两个35S完全和你要插入的没有关系。你需要自己构建一个转录单元插入进去。如果你要做超表达的话，建议你换一个载体。或者找别人已经改造好的pCambia1301