用DNS法总测不出酶活
我用的是以CMC-Na为底物的液体发酵培养基。取发酵液,10000转左右离心5分钟作为粗酶液。0.5ml粗酶液+1.5mlPH4.8的乙酸乙酸钠缓冲溶液,反应时间1h,温度50度。对照是粗酶液沸水浴五分钟。最后DNS1.5ml,沸水浴五分钟。540nm测吸光度,结果几乎为零,还会出现负值。DNS做标线也没出现问题。求指导
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我用的是以CMC-Na为底物的液体发酵培养基。取发酵液,10000转左右离心5分钟作为粗酶液。0.5ml粗酶液+1.5mlPH4.8的乙酸乙酸钠缓冲溶液,反应时间1h,温度50度。对照是粗酶液沸水浴五分钟。最后DNS1.5ml,沸水浴五分钟。540nm测吸光度,结果几乎为零,还会出现负值。DNS做标线也没出现问题。求指导
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反应底物是什么,没有加合适的底物当然测不到酶活,你的底物可能不是发酵液中酶特定的底物,专一性强,
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墒悄忝枋龅姆椒ɡ锞兔惶峒尤氲孜锏氖掳 MC加了多少,还有,滤纸也能当底物,我这是第一次听说。
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酶液浓度是不是太低了