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关于pPIC9K载体克隆遇到的问题

江湖救急!有没有做过pPIC9K载体克隆的大神,为什么我的克隆总是不成功呢?   酶切之后跑电泳,片段正常,为什么就是连接不上去呢?做了好几次转化,每次都是一个菌都不长,很是头疼呀!!望有经验的大神能帮帮我,不甚感激!  返回小木虫查看更多

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用户评论

你是怎么确定酶就一定把你的目的基因给切开的那?

2楼: Originally posted by 781055707 at 2017-05-17 08:07:59
你是怎么确定酶就一定把你的目的基因给切开的那?
跑电泳,起码质粒的形态不同了,成了条带状,而且用的是taraka的内切酶,不知我这样判断对不对?

3楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-05-17 08:43:16
跑电泳,起码质粒的形态不同了,成了条带状,而且用的是taraka的内切酶,不知我这样判断对不对?
...
不是质粒,是PCR产物的目的片段,

4楼: Originally posted by 781055707 at 2017-05-17 09:49:06
不是质粒,是PCR产物的目的片段。...
这个,我还真是没法判断。应该如何判断呢?我已经酶切过两次了,过夜切的~

你用的是哪两个酶切位点

6楼: Originally posted by dellxiong at 2017-05-17 17:11:35
你用的是哪两个酶切位点
EcoRI   NotI

7楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-05-17 21:15:56
EcoRI   NotI
...
我做过这俩位点的克隆,很顺利,你的问题主要是不长单克隆,你先转一个空载体pPIC9K到大肠杆菌,看能不能长出单克隆。(验证载体无误)

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