小木虫

当前位置：首页 > 分子生物 >PCR产物直接测序得到双峰

PCR产物直接测序得到双峰

作者 吴晓雯: 来源: 小木虫 550 11 举报帖子

+关注

我做是海洋软体动物DNA条形码方面，序列（700bp）是通过PCR产物直接测序获得的（双向测序）。其中有不少出现双峰的情况，这样的结果我应该怎么办？求大神指导返回小木虫查看更多

今日热帖

精华评论

Real000Lee

有图么？如果只是个别位点双峰并且双向测序都是这个结果，可能是由单核苷酸突变引起的或者是PCR扩增失真，如果大段序列都是这样，要么样品被污染有问题，要么测序有问题。
apety

你给的峰图应该不是出现双峰的位置，应该是污染的可能性比较大。建议做连接转化挑取单克隆或者重新设计引物
吴晓雯

我用的是全式金海洋生物提取试剂盒提取的总DNA，如果是污染问题，那么我的很多样本都出现这样的问题，难道几乎成批次的污染了？请大神帮忙
Real000Lee

引用回帖:
6楼: Originally posted by 吴晓雯 at 2017-05-07 12:45:14
我用的是全式金海洋生物提取试剂盒提取的总DNA，如果是污染问题，那么我的很多样本都出现这样的问题，难道几乎成批次的污染了？请大神帮忙

同一个位点双向都是双峰么？
Real000Lee

引用回帖:
6楼: Originally posted by 吴晓雯 at 2017-05-07 12:45:14
我用的是全式金海洋生物提取试剂盒提取的总DNA，如果是污染问题，那么我的很多样本都出现这样的问题，难道几乎成批次的污染了？请大神帮忙

个人认为这个不太像无关序列的污染，我送过很多样品，被无关序列污染的峰图要比这个乱得多。如果双向都是在同一个位点出现这种套峰情况，我还是倾向于核苷酸突变或者也有可能是近源dna污染，可以挑单克隆试试
，