全长P不出来怎么办，求指导
求哪位大侠给设计一对引物来扩增全长（3512bp），我已经做了2对引物了，都做了温度梯度，然而都没有任何条带
ACACGTACGTTGTGAGTTGTGACCACTACTTTCCCACAAAGAATTTTTTTTTTTTTTCCTAAAAATAAAAAAGATCTCATTTCTATAAGTTGTTTTAGTTTGATTTTACTTGCAGAAGAAAATTGAAGACATGGGAACTGAGGATCATCACCACCAGCATCATCATTCGGACACAGAGGTTCTTGGCAACGAGAGGATCCCGTACAGTGGTCCGCTAAGCGGCCCTTTGAACAAGAGAGTTGGCAGGAAGAGCACCAAGTTTAATTTGGCGACGGAATCAAGCTCAGGCTCGTCACCTCACGATGAGCCTTACGTTGAGATCACACTCGACGTCCGTGACGACTCGGTGGCTGTTCACAGCGTTAAGGCCGCTGGTGGGGATCATAGTAATCTTCAGGAAGATCCTGAGATTACTTTACTTGCAAAAGGGTTAGAGAAAAGGTCAACTTCTTTTGGTTCCAGTGTTGCTAGAACGGCTTCCGCGAAAATCAGGCAGGTGTCTCAAGAGCTCAAGCGCTTGGCTTCCTTTGCGAAGAAGCCTCAGCCGCCTGCCCGGTTTGATAGGAACAAGTCTGCTGCAGCTTATGCTTTGAAGGGGCTCAAGTTCATTAGCAAGACTGATGGTGGTGCTGGTTGGGCTAATGTTGAGAAGCGATTTGATGAAATAACCGCATCTACTAATGGGGTCTTGCCTCGAGCTCGCTTTGGCGAATGCATAGGAATGAACAAGGACTCGAAGGATTTCGCTGTTGAGTTGTTTGATGCTCTTACTCGGAGACGTAATATTCAAGGGGATACAATCACTAAGGATCAGCTAAGAGAGTTTTGGGATCAGATCTCTGATCAGAGTTTTGATTCCAGGCTTCAAACTTTCTTTGACATGGTTGATAAAGATGCAGATGGCAGAATCACGGAAGATGAAGTCAGAGAGATTATCACTCTCAGTGCTTCAGCAAACAAGCTCTCAAATATCCAGAAGCAAGCAGAGGAATATGCAGCTCTTATTATGGAAGAATTGGATCCTGACCATCTCGGATACATCATGATAGACAACCTGGAAATGCTTCTGTTACAAGCACCGGCGCAATCTGTTAAAGGTGGTGAGAGTCGAAACTTGAGCCACATGTTGAGCCAGAAGCTGAAGCCTACACAATTTGACAACCCAATTAGGAGATGCTGCGACAGCACCATGTACTTTTTACTGGACAATTGGCAAAGGGTGTGGGTGATGGCACAGTGGATTGGAGTGATGGCAGGGCTATTTACATACAAATACATTCAGTATAAAAACAGAGCTGCATTTGAAGTAATGGGACACTGCGTGTGCATGGCCAAAGGTGCTGCTGAGACGCTAAAATTCAACATGGCTCTGATTTTATTACCCGTCTGTCGAAACACCATTACATGGCTCAGAAACAAGACCAAACTCAGTGGTGTTGTTCCATTTGATGACAACCTCAATTTCCACAAGGTGATAGCAGTTGGAATCTCAATTGGGGTCGGAATACATGCTATTTCACATTTAGCATGCGATTTCCCTCGGCTTATAAATGCAAGTGAAGAGAAGTATGAGCCAATGGAGCCATATTTTGGGGATCAGCCCAAAAATTACTGGCATTTTGTGAAGTCAGTAGAAGGGGTAACTGGGATTGTGATGGTTGTTCTGATGGCTATCGCCTTCACACTTGCAACCCCATGGTTCCGGAGAAACAAGCTCAATTTGCCAAAGCCGTTAAAGAAGCTCACTGGGTTCAATGCCTTTTGGTATTCTCATCACCTTTTTGTCATCGTTTACACCCTGCTCATTGTGCATGGCCAATACCTTTACTTGACCAAAAAATGGTACAAGAAGACGACATGGATGTACTTGGCAATTCCAATTTGTCTTTATGCCACTGAGCGGTTGATTAGGGCACTGAGGTCAAGCATTAAGGCAGTTTCCATACAAAAGGTGGCTGTTTATCCTGGAAATGTGCTGGCTCTTCACATGTCAAAGCCAGATAGATTCAGATACAAGAGTGGGCAGTACATGTTTGTCAATTGTGCTGCTGTGTCCCCATTCGAATGGCACCCATTTTCAATAACTTCTGCCCCGGATGATGACTACCTCAGTGTTCACATTAGAACTCTTGGTGACTGGACTCGTCAACTCAGAACAGTTTTCTCAGAGGTATGCCGACCACCTCCAAACGGAATAAGTGGACTCCTCCGAGCCGAGGGACATAACAATCCTGATTTTCCTAGAGTTTTGATTGACGGTCCATATGGAGCTCCAGCACAAGACTACAAAGAGTATGAGGTGGTTTTATTAGTTGGTCTGGGAATTGGAGCAACTCCGATGATCAGCATTGTTAAAGACATAGTGAACAACATGAAAGCCATAGAGGAAGAAGAAGAAAATGATTTAGAAAACGGTCGTGACACCGGCGTTAACACAACATCATCATCATCGACAACAACCACGAGCCCTTCTTCTTCTGGACACAGAAGAAGGGACCAATTCAGGACAAGAAGAGCATACTTCTATTGGGTTACAAGAGAGCAAGGCTCGTTCGATTGGTTTAAGGGAGTGATGAATGAGGTGGCTGAATTGGACCACAACAATGTCATAGAGCTTCACAATTACTGCACCAGTGTTTATGAAGAAGGTGATGCTCGCTCAGCTCTCATTGCCATGCTTCAGTCCCTCAATCACGCCAAGAATGGCGTTGACGTTGTCTCTGGAACACGCGTTAAGTCACATTTCGCCAAGCCTAATTGGCGCAATGTGTACAAACGCGTTGCTCTCAATCACCCTGATTCTAGAGTTGGTGTTTTCTATTGCGGGGCACCGGCACTGACAAAAGAGCTACGACACCTAGCTTTGGATTTCTCTCACAAGACAAGCACCAAGTTTGATTTCCATAAAGAAAACTTCTAGATCAAGTCCCTCCTGATTTCCACCATTATATATCATCTCTTCCACTCCGTTTTCTCGTACAAAGCCTGTGGCATGGCCCACTGGCCCTTATGTTTATAGAAAAATCATATCAATATTTGTTTGGTACCCAGTTGATTTTGCTGCAAAATCACTAATAGAGAGCATTAGAAATATCAAGCGGACAAAGGTTGGTGGGTAGTTGATATCAAGGCCACACCACACTGGACACACAACACATGGCAAGGGAGATATAGGCCGAAAAAGGGGTTTAGCAAAAAAGTCATGCTCAGCCATTTCCTTTTGTTAAAAGTTGTGGTCCAAGCCAATAATTTTGTGAGAAATAGTAATAATGGCAGCCTGGCAGCCACCACTAATAATGGCAGCCTGGCAGCCACCACCAACTCAGTCCTTAACAGCCAAATGTAAAAGGGTTTTTGTTTTGTTTTCTTTTCTTTTTGGTTGGAGTAATTTGTTGTTTTATTTGATTAATTAAAGTTGCGATGTCAATTGAATGGGGTCGTAAGCCCTTTAAAATGTAAGTATGTATTGAATAATTAGTTCGGAGTACACTTTACCCAATTTCTTATGTTTC
这是我之前的引物
F1：ACACGTACGTTGTGA
R1：GAAACATAAGAAATTGGG
F2：ACACGTACGTTGTGAGTTGTGACCACTACTTTCCCACAAA
R2：GAAACATAAGAAATTGGGTAAAGTGTACTCCGAACTAATT
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第二对引物应该可以扩增出来，建议使用高保真酶扩增，延伸时间提高到三分钟试试
我最近扩的全长都是六千左右的，用的primerstar，都扩出来了，楼主可以试试
酶要好，再一个，模板有没有问题
试试这个：
F: ACACGTACGTTGTGAGTTGTGAC
R: GAAACATAAGAAATTGGGTAAAGTGTACTC
引物和模板都没问题的情况下，调整温度有时作用不大，最好换个酶试试，效果立竿见影
我是想先看看有没有条带，再换成高保真酶的，延伸时间都提到4分钟了，什么条带也没有�
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