TAKARA的T4连接酶说明书上是25ul体系,有的人又说酶连体系越小效率越高,各位通常的酶连体系是多大啊?体系的组成呢?谢谢~~ 返回小木虫查看更多
体系我一般用10或者20 uL(有点多哦) 除了酶和buffer体积固定,片段和载体根据浓度来分配。
越小碰撞几率越大嘛,相同浓度条件下,另:宝生物这个连接酶做粘端还行,说明书也没说平端要怎么做。我买过FERMENTAS的做过比较,它上面说酶用量加五倍,各种连接按照推荐体系,一下就连上了。后来也用粘端做过对比,宝生物的克隆只有不到的人家的三分一,效率不怎么样阿…
体积小并不是碰撞几率大吧?这个应该是和浓度相关的。体积小,所以连接的片段浓度也高。
相同浓度下…
大体系酶切,小体系连接,10ul连接体系,0.5ul载体,加大目的片段浓度,我们通常用这个体系,挺好用的!
我们一般用10微升,如果连得上就能上,10微升足够了;如果连不上再多也无益。
体系我一般用10或者20 uL(有点多哦)
除了酶和buffer体积固定,片段和载体根据浓度来分配。
不错,是这样
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越小碰撞几率越大嘛,相同浓度条件下,另:宝生物这个连接酶做粘端还行,说明书也没说平端要怎么做。我买过FERMENTAS的做过比较,它上面说酶用量加五倍,各种连接按照推荐体系,一下就连上了。后来也用粘端做过对比,宝生物的克隆只有不到的人家的三分一,效率不怎么样阿…
体积小并不是碰撞几率大吧?这个应该是和浓度相关的。体积小,所以连接的片段浓度也高。
相同浓度下…
大体系酶切,小体系连接,10ul连接体系,0.5ul载体,加大目的片段浓度,我们通常用这个体系,挺好用的!
我们一般用10微升,如果连得上就能上,10微升足够了;如果连不上再多也无益。