【求助】铁皮石斛甘露糖的含量测定(2015版药典)
求助!关于铁皮石斛的甘露糖测定,按照药典2015版方法进样测定后,发现对照品中甘露糖和PMP的峰没有分开,出现一个响应值达到3000的怪峰,一个叉很大的峰,供试品和葡萄糖对照品一样如此,究竟是什么问题呢?
我的液相是岛津LC-15C,色谱柱是依利特的C18色谱柱,柱温30度,进样量是10μl,之后将进样量调成5μl,依然是得到同样的峰。
是否因为前处理哪里的问题呢?是否PMP与单糖未发生衍生反应?但已经按药典重复操作3、4了。
希望大家帮帮忙,万分感谢~!
中国药典中铁皮石斛甘露糖含量测定方法:
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.02mol/L的乙酸铵溶液(20:80)为流动相;检测波长为250nm。理论板数按甘露糖峰计算应不低于4000。
校正因子测定 取盐酸氨基葡萄糖适量,精密称定,加水制成每1ml含12mg的溶液,作为内标溶液。另取甘露糖对照品约10mg,精密称定,置100ml量瓶中,精密加入内标溶液1ml,加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取400μl,加0.5mol/L的PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μl,混匀,70℃水浴反应100分钟。再加0.3mol/L的盐酸溶液500μl,混匀,用三氯甲烷洗涤3次,每次2ml,弃去三氯甲烷液,水层离心后,取上清液10μl,注入液相色谱仪,测定,计算校正因子。
测定法 取本品粉末(过三号筛)约0.12g,精密称定,置索氏提取器中,加80%乙醇适量,加热回流提取4小时,弃去乙醇液,药淹挥干乙醇,滤纸筒拆开置于烧杯中,加水100ml,再精密加入内标溶液2ml,煎煮小时并时时搅拌,放冷,加水补至约100ml,混匀,离心,吸取上清液1ml,置安瓿瓶或顶空瓶中,加3.0mol/L的盐酸溶液0.5ml,封口,混匀,110℃水解1小时,放冷,用3.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性,吸取400μl,照校正因子测定方法,自“加0.5mol/L的PMP甲醇溶液”起,依法操作,取上清液注入液相色谱仪,测定,即得。
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把流动相的比例调整一下到18:82看看,药典方法的流动相比例是可以微调的
把你的色谱柱用高浓度乙腈再生一下试试
你好!想再请教一下,甘露糖对照品出峰了,但供试品中对应的保留时间内没有出峰,请问是什么问题呢?流动相微调过了,会是前处理出问题了么?
对照品.jpg
供试品.jpg
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建议换根别的厂家的柱子试试,我们也用过这种柱子,不如安捷伦的或是国产欧姆妮分离效果好
你好~谢谢你的意见,我更换了一条菲罗门的色谱柱,杂峰的响应值依然比较大,峰型也不好看。不知道是什么问题了