因为需要做实时荧光定量PCR,所以先做普通PCR扩增cDNA,但是没有条带,降过温度也用过两步法,均无条带。但用这对引物扩增基因组DNA时,却能扩增出条带,这说明引物应该没问题啊,但是为什么cDNA无法扩增条带呢,求大神指点,万分感激! 返回小木虫查看更多
想补充一下,cDNA用内参基因扩过,也用于扩过其他基因,都可以扩增出条带,求解释啊求解释!
引物设计有问题?
PCR扩增;无怪乎模板、引物、反应条件(试剂、时间、温度) 从你不完整的叙述中可以判断的是cDNA 能扩增内参,说明cDNA没有问题;gDNA和cDNA使用同一种引物gDNA可以扩增,但cDNA 无扩增,不知道你的引物是怎样设计的。gDNA所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA是从mRNA反转录来的,是已经过剪接、去除了内含子的cDNA,很有可能是引物设计在外含子上了。
想补充一下,cDNA用内参基因扩过,也用于扩过其他基因,都可以扩增出条带,求解释啊求解释!
引物设计有问题?
引物应该是没有问题的,这是第二对引物了,依然扩增不出来
应该不是引物问题,因为换过引物
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PCR扩增;无怪乎模板、引物、反应条件(试剂、时间、温度)
从你不完整的叙述中可以判断的是cDNA 能扩增内参,说明cDNA没有问题;gDNA和cDNA使用同一种引物gDNA可以扩增,但cDNA
无扩增,不知道你的引物是怎样设计的。gDNA所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA是从mRNA反转录来的,是已经过剪接、去除了内含子的cDNA,很有可能是引物设计在外含子上了。