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PCR使用同一引物扩增基因组有条带,cDNA无条带

作者 修香恋
来源: 小木虫 950 19 举报帖子
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因为需要做实时荧光定量PCR,所以先做普通PCR扩增cDNA,但是没有条带,降过温度也用过两步法,均无条带。但用这对引物扩增基因组DNA时,却能扩增出条带,这说明引物应该没问题啊,但是为什么cDNA无法扩增条带呢,求大神指点,万分感激! 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • 修香恋

    想补充一下,cDNA用内参基因扩过,也用于扩过其他基因,都可以扩增出条带,求解释啊求解释!

  • zhaozhibozhi

    引物设计有问题?

  • 修香恋

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-20 23:24:12
    引物设计有问题?

    引物应该是没有问题的,这是第二对引物了,依然扩增不出来

  • 修香恋

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by fendouzi at 2017-04-20 23:53:53
    内参能扩出来,说明cDNA没有问题。基因组有带,又不一定cDNA就能扩出带,如果你的引物序列只一部分在cDNA上呢?就会出现扩不出来的情况

    应该不是引物问题,因为换过引物

  • wenting9999

    PCR扩增;无怪乎模板、引物、反应条件(试剂、时间、温度)
    从你不完整的叙述中可以判断的是cDNA 能扩增内参,说明cDNA没有问题;gDNA和cDNA使用同一种引物gDNA可以扩增,但cDNA
    无扩增,不知道你的引物是怎样设计的。gDNA所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA是从mRNA反转录来的,是已经过剪接、去除了内含子的cDNA,很有可能是引物设计在外含子上了。

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