枯草杆菌扫描电镜找不到菌体
做的扫描电镜，但找不到菌体，前辈能不能指教一下
前处理是：1）LB肉汤，4500rpm 收集菌体；2）0.2M PBS 洗涤菌体；3)加菌液到盖破片；4）2.5%戊二醛固定4h；5）50、70、80、90和100%乙醇梯度脱水：6）50和100%叔丁醇置换；7）冻干
菌1.png
菌1+抑制剂.png
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菌2+抑制剂.png
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京公网安备 11010802022153号
我的叔丁醇是固体的，请问100%叔丁醇还怎么做 的？
直接买液体的不就完了，很贵吗？
收集对数生长期的新鲜菌液（过夜就差不多了），无菌水洗涤3次，置于2.5%戊二醛磷酸缓冲液（pH7.2）中，于4℃固定过夜；次日以0.15%的同一缓冲液冲洗；然后依次用40%、70%、90%和100%的乙醇分别脱水15 min；脱水后用醋酸戊脂置换乙醇；将上述样品于真空冷冻干燥机中干燥
我的枯草芽孢
2131.png
，
您好，叔丁醇置换15分钟不就又凝固了，还有离心