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酶切过后跑胶,总是出现比较多杂带,找不出原因。

按老师要求酶切过夜,但8F8R引物那一组,老是出现杂带(之前PCR,探索最适温度,应该没出什么问题,后来又验证了一次温度应该是确定了)
而且按说DNA提取以及PC2过程也没什么问题
酶切时间过夜长也应该不会,切除其他条带来,因为具有引物具有特异性(而且条带也就几百kb,不算太长)
酶切过后跑胶,总是出现比较多杂带,找不出原因。
酶切过后跑胶,总是出现比较多杂带,找不出原因。-1

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用户评论

请各路大神帮忙分析一下。

是因为污染吗?但也不像呀!

不要沉呀啊,请各位大神求助一下。

。。。。。。。。

简单说一下实验内容吧。没头没尾的,很难理解

酶切的时间过长,建议3h试试

8楼: Originally posted by enjoy大志 at 2017-04-20 15:57:25
酶切的时间过长,建议3h试试
额,能确定是酶切时间过长导致?
跟老师讨论过

7楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-20 00:35:42
简单说一下实验内容吧。没头没尾的,很难理解
其实就是在提取完DNA产物之后。
用三组不同的引物进行PC r扩增,然后酶切过夜进行分型,(在此之前,试着摸索了PCR的最适退火温度),
其中一组引物酶切过后的结果咋在就是这样比较多,而且于目标带分不清楚。
求大神赐教

8楼: Originally posted by enjoy大志 at 2017-04-20 15:57:25
酶切的时间过长,建议3h试试
谢谢,我记得说明书上,建议是四个小时,回头我们再试试,谢谢!

7楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-20 00:35:42
简单说一下实验内容吧。没头没尾的,很难理解
然后其中一组,跑出来的杂带就比较多(酶切过后),
钱也用同组的PCR产物进行了跑焦对比,有杂带,但不是太明显
()

能不能不管杂带,直接切胶回收目的片段,然后检测?

切碎了,时间太久酶产生非特异切割,,缩短时间,要是核酸含量比较高,可以分批次加酶

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