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诱导表达的蛋白主要在包涵体中，已带有GST标签，求助分离纯化的操作方法？

求助:
诱导原核表达，进行SDS-PAGE检测，主要以包涵体的形式出现，查询得知有超滤、透析等方法，但不知道具体该如何操作？
购买了一个GST分离纯化的试剂盒，，，但说明书为英文版，，看得似懂非懂，，，不知如何下手？

望高手指点，谢谢你们！返回小木虫查看更多

今日热帖

蓝蓝0921

逐字逐句翻译→_→
Hjqilu

换MBP载体吧
upwardkl

引用回帖:
3楼: Originally posted by Wawa521 at 2017-04-18 21:48:58
我也是GST标签，表达后也是在包涵体，纯化了几次也纯化不出来，现在正在换载体

好吧，谢谢你
，
upwardkl

引用回帖:
4楼: Originally posted by Hjqilu at 2017-04-19 00:16:24
换MBP载体吧

请问你曾经使用过嘛？效果如何？
cxw123

超滤和透析都是后续工作，你首要任务让蛋白可溶，GST本来是为了让蛋白可溶的，要是加了GST还是包涵体，可以考虑更换培养基，用TB培养基可以提高可溶性，降低诱导剂浓度和诱导温度，可以拿到可溶的蛋白，不推荐进行包涵体复性，GST融合蛋白蛋白复性不成功不会挂柱，后续纯化仍然很麻烦
upwardkl

好的，谢谢你的应助！