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求助蓝白斑筛选的相关问题

我涂的板为什么会培养基都变蓝色,而且也没有多少白菌,挑一两个看似白菌的菌落再划线到新制的含氨变青霉素,x-gal,IPTG的平板上结果都又是蓝色,想知道是什么原因,有木有人能给解释一下,谢谢!


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用户评论

用JM109菌株,不要用BL21或者MG1655

蓝白斑的原理是α互补。JM109的LacZ基因缺少α片段,因此,不能分解x-gal显蓝色。质粒载体上有完整的α基因序列,多克隆位点也在这段序列内

如果在这个位点插入了外源片段,将会破坏α阅读框,这种破坏大部分情况下会造成α基因失活。如果没有插入外源基因,α片段就可以表达,使得基因LacZ组装完整,分解x-gal显蓝色

出现大片的蓝斑,一是可能根本没连上外源片段,全是自连接。二是插入的片段未能使α基因失活,虽然正确插入了,却依然是显蓝斑,这种情况一般常见于插入片段小于500bp,但是也有报道插入2000bp也依然无法失活α片段,显蓝色,

第三种,就是你用了LacZ基因完整的菌株,例如BL21,MG1655。这些菌株的LacZ基因是完整的,只要有诱导剂和显色剂,就会显蓝色

排除第三种,直接把菌株涂布在IPTG和x-gal上,看是否显色

排除第一种,直接不要加片段,转化空载体,看是不是因为载体自连接效率太高导致的。

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