PCR总是p不出来啊，大神们求助
PCR总是p不出来，图中是体系跟程序，有时候配了4管一模一样的，只有一管有目的片段，后来再p一管也p不出来，稀释了模版十倍，20倍，，也没用，酶la taq..primer star 都试过，摸过梯度，现在一筹莫展。。
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加一下单链结合蛋白再试一下
是不是仪器的原因？
按道理一模一样，可能就是仪器的问题
1. 首先要确定你的引物设计的没问题，因为基因组上突变不较多，如果引物太短很有可能影响扩增效率，可以适当加长引物长度，或者用兼并引物；
2. 保证基因组DNA提取的纯度，这个很重要，然后是完整度；
3. 如果做过退火梯度还不行，可以试一下touchdown PCR；
4. 考察一下这段基因组DNA的GC含量，如果太高，换用LA Taq的GC buffer，
试一下touch up pcr
我是做微生物的，有个师妹各种p, p了一个学期没p出来，最后找到原因是老师给错菌株了，想提醒一下楼主，不要放过类似这种问题的排查