【求助】Ni亲和层析 杂蛋白与目的蛋白一同被洗脱
如题,用BL21表达蛋白,大小120KD,预测等电点为5.68。(PS:我扫描胶的效果不好,但能说明问题就行了)
细胞破碎液过镍柱后洗杂蛋白,并用含咪唑(50,100,150, 200, 300, 500mM)的咪唑洗脱液洗脱,总是有杂蛋白在洗脱液里。图中beas就是镍柱,表明我的蛋白是挂在镍柱上了。(PS:不知道为什么,诱导前后看不到我的目的蛋白表达量升高,之前小量诱导的时候,确定该蛋白能被诱导。)
尝试了用500mMNaCl洗脱(不含咪唑)杂蛋白,发洗脱中的杂带并未改善。
请教各位大侠,有什么办法可以解决这个问题?
图片1.png@gyesang@hc-material 返回小木虫查看更多
今日热帖
请大神们帮帮我啊,悬赏金币啊!
顶上去,谢谢大家
祝
我的蛋白也是这样,蛋白又少条带又杂,跪求答案
再过个离子交换吧,镍柱纯化效果没有想象的那么高,除非你的蛋白表达量超高,否则还是要进一步纯化的,