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求助氨基酸柱前衍生

作者 小豆芽_won
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
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我看了一篇关于D,L-氨基酸检测的文章,用c-18柱子和柱前衍生的办法能分析某些氨基酸,衍生剂是OPA和Boc-L-Cys,我的衍生剂配法是两种衍生剂各0.1g用1mL无水乙醇溶解,加入100μL的巯基乙醇做还原剂,再用pH6.5的硼酸盐缓冲液定容至10mL,在线的柱前衍生。流动相是磷酸盐:乙腈:四氢呋喃(A:92:5:3,B:45:50:5,V:V)线性洗脱。柱温40℃,荧光检测,激发和放射波长为334和443。
我做的标样是0.1g/L的D-Arg和L-Arg,但是同一个样品跑出来的峰毫无重现性,也看不出什么规律,有时2分钟就出峰,有时20多分钟出峰,峰形也很怪。
请教我的衍生剂配法有没有问题,问题可能出现在哪里呢,还有什么要注意的吗?我第一次用液相,求教啊 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • 小豆芽_won

    大神快来啊

  • 小豆芽_won

    为什么没人呢,我都看了多少相亲贴了

  • 兜兜兜兜

    楼主做的怎么样了,PH应该会影响,我有遇到过这种情况,在反应的最后加5UL酸中和就好了。但是我现在做的重复性不太好,线性也不好,如果楼主做出来了不知道能否分享下经验,

  • 1137571371

    楼主,我最近也在做D,L氨基酸的液相分析,我看到的衍生剂跟你是一样的,请问你用的是什么型号的C18柱?什么牌子的?能否分享一下经验。

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