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蛋白质SDS-PAGE的分离胶不能跑到尽头,一直在上游

蛋白质一直跑不下来,一到分离胶中游就不动了,电压,浓缩胶40,分离胶60-80。本人多次做实验,药品也更换了好多次,每次都这个结果。看过好多帖子,也没注意到有我这种情况的。还有就是压不成一条线,中途分成两条线了。我现在推测可能是胶凝的不好,分离胶是30s左右开始凝固,再静止30min,浓缩胶5-8min开始凝固,静止1h.各位大神和做过相关的,有啥建议指点指点小弟

biostar2009 飞约疯人院 wizardfan youlinglyw

用户评论

你跑胶的电压也太小了吧 ,100v跑分离胶,还有你的电泳装置可能漏液导致电压上不去

换一个aps试试

电极缓冲液也可能不正常

4楼: Originally posted by dongmings at 2017-03-18 22:52:22
换一个aps试试
过硫酸铵应该只是催化剂,是通过影响胶的凝结速度导致的嘛?那正常胶的凝结速度应该是多少?

2楼: Originally posted by pf790352975 at 2017-03-18 22:47:52
你跑胶的电压也太小了吧 ,100v跑分离胶,还有你的电泳装置可能漏液导致电压上不去
那只把分离胶的电压调了,浓缩还40v跑,不过我一直调到80v电压都能上去,再高就没试过了,还有我新跑的胶用的ladder做标准品,染色和刚开始染色后ladder并没有条带?是ladder不能做标准品嘛,跑的时候还看到ladder跑下去了

5楼: Originally posted by dongmings at 2017-03-18 22:53:21
电极缓冲液也可能不正常
电极缓冲液我是用tris1.5g,甘氨酸7.2g,SDS是0.5g定容500mL

这是跑的(⊙o⊙)啥?做了好多次,基本每次都正常出来。检查一下缓冲液吧,loading有没有问题。

9楼: Originally posted by 705369449 at 2017-03-19 07:34:52
这是跑的(⊙o⊙)啥?做了好多次,基本每次都正常出来。检查一下缓冲液吧,loading有没有问题。
这个是配方有问题,还是可以发你的缓冲液参考一下嘛,我每次跑,放热都挺厉害,拿出来,胶都是热的

1你的电泳缓冲液是否有问题?2你的Loading是否正常?3样品在制备中是否变性完全,与SDS结合?4个人经验,电压太低,浓缩80,分离120

11楼: Originally posted by 醉虾米 at 2017-03-19 08:42:44
1你的电泳缓冲液是否有问题?2你的Loading是否正常?3样品在制备中是否变性完全,与SDS结合?4个人经验,电压太低,浓缩80,分离120
1,电极缓冲液如何检查,可以给个提示嘛,我跑的时候tris1.5g,sds0.5g,甘氨酸7.2g定容500mL,,发热比较厉害,我在通风好的地方跑
2sds刚换了个牌子的比上次要好一点,条带出来了,比这次的再往下跑了一点,还是不到下游,现在是中游
3,loading是现配现用,tris-hcl2mL,sds4mL,溴酚蓝0.5mL,蒸馏水0.5mL,甘油2mL,再加上少量蔗糖,1:1煮沸5min,上清液加样10uL左右。请指导
4,电压我在试个高一点的。
我刚跑的一块用的ladder做标品,只有最上面有一个条带,何解

1缓冲液和我配方一样,发热严重是不是电泳槽出现了漏液导致电阻增大,发热严重?也可以将电泳槽放入冰水浴中,效果不错3loading中配方不同,我还有贝塔巯基乙醇,且配的是5倍浓度,煮制样品是浓度稀释小,可以加我扣扣939451182或者加入251982398专业群讨论

如果你的电泳槽不漏的话,我猜很可能是你缓冲液的PH

10楼: Originally posted by 远呀其 at 2017-03-19 07:41:43
这个是配方有问题,还是可以发你的缓冲液参考一下嘛,我每次跑,放热都挺厉害,拿出来,胶都是热的
...
热了就这样,下次把整个泡电泳的那一套,放在盆里,盆里放满了冰水混合,水别流进去,别触电。哈哈,配方我暂时没有带,我都毕业两年啦。不行你买一瓶子10乘的缓冲液用一下看看,又没多少钱。

分离胶的浓度!

我每次先80伏跑三十分钟再120伏跑40分钟

15楼: Originally posted by 705369449 at 2017-03-19 17:07:49
热了就这样,下次把整个泡电泳的那一套,放在盆里,盆里放满了冰水混合,水别流进去,别触电。哈哈,配方我暂时没有带,我都毕业两年啦。不行你买一瓶子10乘的缓冲液用一下看看,又没多少钱。
...
知道了,我试试

16楼: Originally posted by 半间屋 at 2017-03-19 18:26:26
分离胶的浓度!
我用的是15%的分离胶,下面没有蛋白是小蛋白都跑出去了?用小一点的胶?

14楼: Originally posted by 蜗牛上的女孩 at 2017-03-19 14:16:58
如果你的电泳槽不漏的话,我猜很可能是你缓冲液的PH
缓冲液我没测PH按照生化书的配方直接加的

压不成一条带估计缓冲液pH值不对(胶缓冲液及电泳缓冲液);分离胶30s就凝固,这也太离谱了,正常至少10min才凝要么TEMED加多了,要么是AP加多了,再有可能就是胶浓度确实很大;到了分离胶跑不动,也胶浓度大,或者双丙烯酰胺比例太大。

我跑的是浓缩胶80v30分钟,然后100v跑分离胶

21楼: Originally posted by 科学小覃 at 2017-03-20 09:15:23
压不成一条带估计缓冲液pH值不对(胶缓冲液及电泳缓冲液);分离胶30s就凝固,这也太离谱了,正常至少10min才凝要么TEMED加多了,要么是AP加多了,再有可能就是胶浓度确实很大;到了分离胶跑不动,也胶浓度大,或者 ...
我试试将胶浓度降低试试,缓冲液可以参考一下你的嘛

22楼: Originally posted by 蔚蓝97 at 2017-03-20 14:23:36
我跑的是浓缩胶80v30分钟,然后100v跑分离胶
我试试调电压

分离胶和浓缩脚的trishcl缓冲液ph值不一样,千万别弄混了

我猜是漏液了

你没有加甲醇吗?