连接时比较关键的是载体和目的片段的比例  连接酶的话0.5微升就可以
所以我觉得连不上应该不是连接酶的问题

我们最近也在做连接，我们的体系是25微升，我觉得载体根据浓度还是尽量少加点，我们也一直连接效率非常低，阳性克隆非常少，你需要验证下是不是连接酶是不是有问题。

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你怎么确定没连上，筛选是个很重要的步骤

28a是低拷贝 首先说下体系载体1.5  基因6  10??buffer 1  水0.5 酶0.5       16度水浴4到6hr

水1  我们的比例一般在1比3和1比6之间    当然不排除有的基因确实不好连

5311  片段质粒buffer酶，每次都成！