大肠杆菌表达可溶性蛋白,超声破碎后看着没破碎完全,不是那种清澈状,但是镜检看着破碎完全,然而做完纯化后产率超级低, 沉淀还能用破菌液重新悬浮破碎吗? 返回小木虫查看更多
恐怕不行了。也可以试试再超声一下。不过,你的蛋白是包涵体的可能性比较大。是包涵体的话就需要做复性了。
根据我们的经验来说,你超声2次后看一下菌液悬浮液的状况,如果比较清澈透光,说明是上清蛋白的几率很大,直接离心吧,超声次数太多容易让上清蛋白降解。如果超声1次或2次后还是浑浊不透光就说明是很大可能是包涵体蛋白。你的情况极可能是表达在包涵体中了。再次超声也没有用。其实超声几次后细胞已经破碎了。是否上清和包涵体和超声次数没有关系
恐怕不行了。也可以试试再超声一下。不过,你的蛋白是包涵体的可能性比较大。是包涵体的话就需要做复性了。
根据我们的经验来说,你超声2次后看一下菌液悬浮液的状况,如果比较清澈透光,说明是上清蛋白的几率很大,直接离心吧,超声次数太多容易让上清蛋白降解。如果超声1次或2次后还是浑浊不透光就说明是很大可能是包涵体蛋白。你的情况极可能是表达在包涵体中了。再次超声也没有用。其实超声几次后细胞已经破碎了。是否上清和包涵体和超声次数没有关系
以前做过好几次了,都没有这种情况,这次就成包涵体表达了??
你超声不可能把包涵体蛋白变成上清蛋白。以前可能本身是表达在上清中,只不过需要破碎多次才能出来。或者上清和包涵体都能表达。这次都确定是破碎完全了,那就估计是包涵体蛋白了。主要还是看你蛋白的目的,如果是研究功能的话只能复性,如果是其他例如免疫之类的包涵体就包涵体吧。
或者尝试做一下表达的优化死马当活马吧
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