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疑惑,请问为什么在做启动子活性的时候测gus酶活,而不做gus基因的定量PCR?

作者 xdbotany
来源: 小木虫 300 6 举报帖子
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如题,基因发挥功能是通过蛋白行使的,但是现阶段很多研究基因对环境的响应是通过qRT-PCR完成的,那研究启动子活力的时候,能不能通过对GUS基因的qRT-PCR结果来判断启动子活力呢?拜谢。

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  • 精华评论
  • sunjiutong

    楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单,qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观?这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到,干嘛还要开车?

  • xdbotany

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-11 16:32:20
    楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单,qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观?这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到,干嘛还要开车?

    谢谢你的回答,再多问一句,我觉得研究启动子活力的时候,是不是做GUS基因的qRT-PCR更能真是反映启动子的活力呢?因为GUS基因转录量直接和启动子启动能力大小相关,而蛋白是转录后再翻译的,蛋白合成的因素受很多因素影响,而且时效性不如RNA。当然如果做qRT-PCR还是要染色做验证的

  • sunjiutong

    你说的有一定道理,但是,若真做qRT_PCR,你拿什么作为参照呢?

  • xdbotany

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-12 01:04:47
    你说的有一定道理,但是,若真做qRT_PCR,你拿什么作为参照呢?

    如果是遗传转化得到后代苗子,如T1代烟草和拟南芥,可以选择植物自身的内参,如果是瞬时表达,是否可以使用启动子部分作为内参?

  • sunjiutong

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-12 18:52:48
    如果是遗传转化得到后代苗子,如T1代烟草和拟南芥,可以选择植物自身的内参,如果是瞬时表达,是否可以使用启动子部分作为内参?...

    野生型植物基因组当中又没有GUS基因,你怎么选择内参?你以为启动子本身可以作为内参啊?启动子又不转录,怎么做荧光定量的内参????小弟,分子生物学学的不过关啊,要加油。

  • xdbotany

    引用回帖:
    6楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-13 11:23:37
    野生型植物基因组当中又没有GUS基因,你怎么选择内参?你以为启动子本身可以作为内参啊?启动子又不转录,怎么做荧光定量的内参????小弟,分子生物学学的不过关啊,要加油。...

    感谢你的指点,非常受益。我的意思是T1代苗使用植物自身内参,野生型没有GUS基因不是可以做阴性对照吗?我没太明白你的意思,麻烦你说详细一点,非常感谢。还有我也是考虑到启动子不转录,才觉得可以用作内参,相对来说启动子的数量是个定值,获得GUS基因的转录量与启动子自身的数量的比值就OK了,然而我忘了一个是在转录水平,另个在基因组水平,衰。非常感谢你的指点。

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