楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单，qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观？这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到，干嘛还要开车？

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2楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-11 16:32:20
楼主爱思考。请问做qRT-PCR简单还是做GUS染色简单，qRT-PCR结果更可靠更直观还是GUS染色更可靠更直观？这就好比你从学校到宿舍本来步行5分钟就到，干嘛还要开车？

谢谢你的回答，再多问一句，我觉得研究启动子活力的时候，是不是做GUS基因的qRT-PCR更能真是反映启动子的活力呢？因为GUS基因转录量直接和启动子启动能力大小相关，而蛋白是转录后再翻译的，蛋白合成的因素受很多因素影响，而且时效性不如RNA。当然如果做qRT-PCR还是要染色做验证的。

你说的有一定道理，但是，若真做qRT_PCR，你拿什么作为参照呢？

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4楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-12 01:04:47
你说的有一定道理，但是，若真做qRT_PCR，你拿什么作为参照呢？

如果是遗传转化得到后代苗子，如T1代烟草和拟南芥，可以选择植物自身的内参，如果是瞬时表达，是否可以使用启动子部分作为内参？

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5楼: Originally posted by xdbotany at 2017-01-12 18:52:48
如果是遗传转化得到后代苗子，如T1代烟草和拟南芥，可以选择植物自身的内参，如果是瞬时表达，是否可以使用启动子部分作为内参？...

野生型植物基因组当中又没有GUS基因，你怎么选择内参？你以为启动子本身可以作为内参啊？启动子又不转录，怎么做荧光定量的内参？？？？小弟，分子生物学学的不过关啊，要加油。

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6楼: Originally posted by sunjiutong at 2017-01-13 11:23:37
野生型植物基因组当中又没有GUS基因，你怎么选择内参？你以为启动子本身可以作为内参啊？启动子又不转录，怎么做荧光定量的内参？？？？小弟，分子生物学学的不过关啊，要加油。...

感谢你的指点，非常受益。我的意思是T1代苗使用植物自身内参，野生型没有GUS基因不是可以做阴性对照吗？我没太明白你的意思，麻烦你说详细一点，非常感谢。还有我也是考虑到启动子不转录，才觉得可以用作内参，相对来说启动子的数量是个定值，获得GUS基因的转录量与启动子自身的数量的比值就OK了，然而我忘了一个是在转录水平，另个在基因组水平，衰。非常感谢你的指点
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