求助！关于蛋白表达量以及产量的测定
我想要知道每次发酵一定体积的菌液 能够产生多少我的目的蛋白 现在想要制定一个准确的定量方法
我个人的理解是：
（1）关于目的蛋白表达量：利用SDS-PAGE跑全菌电泳 然后用灰度扫描软件进行条带灰度扫描 可以大致确定目的蛋白占全菌蛋白的百分比
但是存在的问题是：这种方法定量很不准确 并且我至今也没有发现一个好用的灰度扫描软件 软件对于条带的标记会因为电泳效果产生较大误差 不该标记的条带会被标记 该标记的往往找不到等等
（2）关于蛋白的产量：取一定量的菌按照一定的方法进行纯化得到我们的目的蛋白 然后测得蛋白浓度 反推计算出全部发酵液能产多少蛋白
以上是我的理解 但是现在的问题是由于一些原因我没法进行纯化的实验 但我希望知道用什么方法能较准确测定我这一批发酵液产的蛋白量 请各位大神给一个思路 谢谢
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京公网安备 11010802022153号
如果你对你的蛋白性质比较了解，是不是可以做一些前处理之类。表达量很高的话，破菌之后，可以考虑简单的分步盐析方法，得到相对纯度大一点的样品。有些时候，重组表达的样品，在合适的盐析条件下，能除去大部分菌体自身蛋白。然后再通过电泳或者紫外的方法定量，那样可能比你直接电泳通过灰度来定量要准确一些。
前处理的目的是使我的目的蛋白所占的比例更大一点 在灰度分析时减少杂蛋白条带的干扰 我的理解对吗
，
可以这么理解。要是纯度高一些，可以直接用紫外检测蛋白的浓度，也相差不是很大，还很方便快捷。
还有一个问题 前处理过程中 我的目的蛋白相应的也会损失一点吧？这个损失率不会影响定量结果么？