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液相跑20种氨基酸

用岛津的20AD工作站跑20种氨基酸,衍生剂为DNFB:
1.丝氨酸跑不出来。
2.其余19种单品都可以解析出来且线性较好。
3.谷氨酸和谷氨酰胺保留时间相差较大,和单品的保留时间差相差过大,怀疑谷氨酸线没有跑出来。
4.组氨酸和苯丙氨酸只有一个峰。
混标是用水溶解的,是不是在这个pH条件下某些类氨基酸会互相作用,还发现混标里的峰很多都明显比单品峰小很多,是反应不完全还是怎样。可是衍生剂峰还是比较大的,说明够用,有虫友可以一起讨论下吗,万分感谢

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用户评论

柱前衍生,应该考虑反应得率,条件需要严格控制

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2楼: Originally posted by 柳絮虫 at 2017-01-09 18:30:16
柱前衍生,应该考虑反应得率,条件需要严格控制
20种氨基酸单品进行跑样没有问题,线性可达3个9,混标跑样峰面积对不上,实在不好判断。你提到的反应得率和严格控制条件是什么意思呢?我当时就跑了三个样品,操作时间很短,应该没什么问题,至于设备也没有出问题,而且单标每种5个梯度,这么多做起来准备时间比这次长多了线性也挺好,这一次一共是19种氨基酸的峰出来后很难判断谁是谁?

谢谢您的回复。我不太理解您说的反应得率,这个如何获知?条件严格控制方面,操作平行性和操作时间控制的应该没有问题。一共两到三个样品,操作时间差可以忽略不计,使用的仪器都是相同的,条件方面应该较为严格

3楼: Originally posted by 徐国栋 at 2017-01-10 09:15:38
20种氨基酸单品进行跑样没有问题,线性可达3个9,混标跑样峰面积对不上,实在不好判断。你提到的反应得率和严格控制条件是什么意思呢?我当时就跑了三个样品,操作时间很短,应该没什么问题,至于设备也没有出问题 ...
氨基酸与试剂反应条件不同,必然导致反应得率不同。即使是标准品(单样)也会出现不同的线性方程。所谓条件控制,就是在同一条件下,类似数量的样品在类似的反应得率下才能获得定量依据。

5楼: Originally posted by 柳絮虫 at 2017-01-10 11:28:11
氨基酸与试剂反应条件不同,必然导致反应得率不同。即使是标准品(单样)也会出现不同的线性方程。所谓条件控制,就是在同一条件下,类似数量的样品在类似的反应得率下才能获得定量依据。...
我现在做出的单品峰虽然每次不太一样,但是大致是接近的,但是混标里比较确定的几种氨基酸同对应的单品峰进行对照发现峰面积相差极大,这如何处理才能使其有助于判断混标里峰形的代表氨基酸?


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