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我的RAW264.7细胞怎么都养不活。。

我养了3个星期的RAW264.7细胞,细胞传代时间把握不好,细胞总是形状不规则。我该怎么办?  返回小木虫查看更多

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用户评论

学习一项技术都是有个艰难的过程,我家孩子也经历这一过程,我让她记录细胞不活的过程,然后与师姐和导师讨论,这样做也可能是一新发现的机会。你要坚持一定能成功。你的细胞不成活的原因是消毒不够彻底,或没有定时喂养饿死了。

2楼: Originally posted by hldj1964 at 2017-01-08 07:59:33
学习一项技术都是有个艰难的过程,我家孩子也经历这一过程,我让她记录细胞不活的过程,然后与师姐和导师讨论,这样做也可能是一新发现的机会。你要坚持一定能成功。你的细胞不成活的原因是消毒不够彻底,或没有定时 ...
谢谢您的回复,我每次都是因为污染。但是污染的原因都不同。我该怎么办?

3楼: Originally posted by 迦木 at 2017-01-08 11:02:18
谢谢您的回复,我每次都是因为污染。但是污染的原因都不同。我该怎么办?
...
每一步都认真去做,不要怕麻烦,消毒的过程做的要彻底。

都是因为污染造成的?是不是培养箱里面的滤膜该换了?如果滤膜脏了或者坏掉的话细胞是非常容易污染的。如果不是污染的问题,换一下血清试试。我之前也是养了好久细胞一直长不好一直找不到原因,后来找培养箱的工程师过来对整个系统重新校准了一遍就好了。但你这不一定是培养环境的问题,可能是血清质量不行,确定是不是有黑胶虫污染。

5楼: Originally posted by w911227 at 2017-01-08 16:16:00
都是因为污染造成的?是不是培养箱里面的滤膜该换了?如果滤膜脏了或者坏掉的话细胞是非常容易污染的。如果不是污染的问题,换一下血清试试。我之前也是养了好久细胞一直长不好一直找不到原因,后来找培养箱的工程师 ...
如何判断黑胶虫?

7楼: Originally posted by 迦木 at 2017-01-08 23:25:34
如何判断黑胶虫?
...
黑胶虫污染的表现:
1. 细胞生长速度减慢,严重时甚至停止生长。
2. 细胞有向间质细胞形态转变的倾向,细胞突起增多,甚至伸出长的类似神经轴突样触角,或细胞梭形改变。
3. 除部分细胞出现上述形态改变外,其余大部分细胞面积变大(注意不是体积),立体感变差,细胞排列疏松,胞核距离增大(注意不是细胞间距离),边缘呈皱褶样,感觉整个细胞变扁软瘫在培养瓶底。
4. 仔细观察,形态出现间质细胞转变的细胞似乎对致病因素的耐受性更强,体积变大的细胞死亡比例更高,继续培养大部分细胞变成多突起或梭形细胞。
5. 细胞对各种处理因素的敏感性增强,细胞容易死亡,平板克隆形成实验在空白组的克隆形成率大约只有正常的1/3—1/2,而且克隆小,松散。
6. 400倍显微镜下观察,细胞胞浆内可见多个折光性强的颗粒,类圆形或短杆样,部分融合成团,细胞周围也可见数个类似的颗粒呈类似布朗运动的扭动。
7. 连续传代,可筛选出部分耐受性较强的细胞,形态相对正常,增殖速度相对正常,但仍不稳定,可能于某次传代后细胞形态再次改变,

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