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我想请教下,土壤微生物培养的问题

我想请教下,最近刚接触土壤微生物丰度,采用的是稀释平板涂抹法,发现土壤在做的过程中,10-6到10-8的稀释度培养过后,各平板培养基上均无菌落生长(28℃,避光培养,培养时间充足),降低稀释度后到10-2到10-4才有明显菌落生长,采用的是新采的土壤样,感觉完全不科学啊。听内行说,一般菌落总数在10-7次方左右。感觉数量级差距太大,土壤样也是她们之前检测过的,大概就在10-7次方左右,就像问下大家有没建设性的建议?

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用户评论

稀释过程没有充分混匀

2楼: Originally posted by angelwhp at 2017-01-05 15:50:49
稀释过程没有充分混匀
哦哦,那你是采用的什么震荡方法?手摇还是直接用移液枪枪头向里面鼓气

用什么培养基,真菌细菌不一样吧。

4楼: Originally posted by CC-Brandy at 2017-01-05 16:39:03
用什么培养基,真菌细菌不一样吧。
细菌:营养琼脂培养基;真菌:孟加拉红(加链霉素);放线菌:高氏1号(加重铬酸钾)

3楼: Originally posted by xfn944936 at 2017-01-05 16:20:16
哦哦,那你是采用的什么震荡方法?手摇还是直接用移液枪枪头向里面鼓气...
解释下手摇:将试管在手掌中轻轻敲打:(:(

加点玻璃珠也可以

5g土加入45毫升生理盐,30度左右摇床30分钟,最好加玻璃珠。土样少了或稀释体系太小误差会大哦。

5楼: Originally posted by xfn944936 at 2017-01-05 17:14:00
细菌:营养琼脂培养基;真菌:孟加拉红(加链霉素);放线菌:高氏1号(加重铬酸钾)...
可以的,我们真菌都用PDA。只是每块土壤都不一样吧,尤其是有没有施用过杀虫剂,杀菌剂之类的。细菌会比真菌数多。

7楼: Originally posted by kentyu at 2017-01-05 18:07:33
加点玻璃珠也可以
嗯,最近有点事,我去试试

8楼: Originally posted by 18291168574 at 2017-01-05 23:45:16
没混韵
嗯嗯

9楼: Originally posted by 张丽娟2012 at 2017-01-06 09:18:55
5g土加入45毫升生理盐,30度左右摇床30分钟,最好加玻璃珠。土样少了或稀释体系太小误差会大哦。
嗯,好的,我去试试

10楼: Originally posted by CC-Brandy at 2017-01-06 09:29:46
可以的,我们真菌都用PDA。只是每块土壤都不一样吧,尤其是有没有施用过杀虫剂,杀菌剂之类的。细菌会比真菌数多。...
嗯,我会比对下的

看培养什么菌落吧,细菌真菌放线菌的稀释度稍微有些不一样,我最近也在做土壤微生物,土样自然条件下放了好几个月,也长,不会不存在没有菌的问题。有可能你用的稀释浓度太小,我是根据书上说的做的,细菌456,真菌123,放线菌345,最小的浓度都不长:shuai:还有可能是浓度稀释或滴加到培养基时没摇匀

我也做了土壤微生物,但是包括原液在内一个菌都没有长出来,为什么呐?你用了什么方法筛菌?

5楼: Originally posted by xfn944936 at 2017-01-05 17:14:00
细菌:营养琼脂培养基;真菌:孟加拉红(加链霉素);放线菌:高氏1号(加重铬酸钾)...
你在高氏一号里不要加重铬酸钾试试,我也做过土壤放线菌的分离,加了重铬酸钾之后不长,不加长的很多,也得稀释到10-7,

会不会是土壤取样点不一样?比如说土壤深度、环境等等

确实是不科学,一般都会在10的-6到-8之间比较好。你把灭过菌的玻璃珠加入到土壤悬液中振荡一会儿试试

还可能有其它不确定因素,例如土壤样层的选择之类的,不过你加重铬酸钾是干啥,,分离耐铬的菌株?还是是不是培养时间过短?一般细菌培养2到3天

10g土壤-100g灭菌水,加7-8个灭菌玻璃珠,恒温摇床上20-30分钟,吸取土壤液体中间部分开始西施,从5梯度开始涂板,涂到7梯度。

我们做稀释摇匀都是用斡旋仪

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