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求助涂布法计数细菌cfu的问题

我是研一的学生,最近在培养大肠杆菌,在稀释的过程中操作出了问题,导致板子长菌的个数有问题,具体操作如下:LB培养基培养1比1000大肠杆菌12小时,接着相同培养基1比100培养4小时后取菌液100微升,分别1倍,2倍,4倍,8倍,10倍,16倍稀释,稀释完毕之后再逐级稀释6次(稀释10的6次方)涂版在10公分的培养基上。培养12小时数板子的点根据稀释倍数来计算cfu。我遇到的问题是:1,板子涂不匀,2,点长的十分密集,3稀释倍数大的点数反而比稀释倍数小的多。
特再次发求助帖希望各位师长能给我解惑。我自己总结是我涂版操作不熟练导致没法涂匀,但是我不知道该如何解决,一直在练手但是感觉效果不明显。但是剩下两个问题不知道原因,我想了解下涂版法的具体操作,因为和我网上查的不太一样,提前在此谢过了

用户评论

1楼: Originally posted by 承让了我的弟 at 2017-01-05 11:36:00
我是研一的学生,最近在培养大肠杆菌,在稀释的过程中操作出了问题,导致板子长菌的个数有问题,具体操作如下:LB培养基培养1比1000大肠杆菌12小时,接着相同培养基1比100培养4小时后取菌液100微升,分别1倍,2倍,4 ...
涂版菌液取的是100微升

给我的感觉就是菌液没有混匀,导致你稀释的时候菌液浓度不均。菌落密集肯定就是你涂布操作的问题了,你不要来回涂布太多次,这样反而使菌分布不均了,另外最好一个浓度涂两个到三个培养皿,这样也方便你比较,希望对你有帮助

3楼: Originally posted by 樱花下的秘密 at 2017-01-05 14:05:48
给我的感觉就是菌液没有混匀,导致你稀释的时候菌液浓度不均。菌落密集肯定就是你涂布操作的问题了,你不要来回涂布太多次,这样反而使菌分布不均了,另外最好一个浓度涂两个到三个培养皿,这样也方便你比较,希望对 ...
非常感谢您的指导!不能来回涂是么,这一点我记住了。还有就是我稀释的时候是用移液枪取100微升菌液打到装有900微升蒸馏水的1毫升离心管中,反复吹打,这样逐级稀释6次,期间要注意什么呢?感觉我吹打了很多次了,但是菌液还是没有混匀。

从原始浓度往下稀释时,前几个梯度,你可以扩大稀释倍数,因为前几个你肯定是无法计数的,关键在于你后面浓度的稀释,稀释倍数可以稍微调整得少一点,也可以适当增加几个浓度。菌液接入培养皿肯定是要用涂布棒来回涂的,但是不能重复这个动作太多次,这样反而不利于均匀涂布。

实在不行,你就平行多个培养皿,每个培养皿中来回涂布的次数不同,这样你就能比较出来,大概操作几次比较合适

6楼: Originally posted by 樱花下的秘密 at 2017-01-05 15:38:42
实在不行,你就平行多个培养皿,每个培养皿中来回涂布的次数不同,这样你就能比较出来,大概操作几次比较合适
谢谢您的指导。。我回去试试,十分感谢


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