启动子与ATG的问题
各位大神，我在做表达载体，因为一开始没经验，当初在设计引物的时候在5’和3’端都加上了保护碱基（貌似都只在5‘端加），
结果现在做出来的表达载体测序发现在目的基因前面多了2个碱基。
我的目的基因本身是ATG开始，TAA结尾的，现在相当于在ATG前面多了CG两个碱基。
我用的pET-28α（+），NheI、XhoI双酶切，看了下图谱，从T7启动子到目的基因之间载体本身还有2个ATG位点，我又好死不死的在
目的基因前面多加了个CG，现在搞得不是3的整数倍了……
想请教大家，启动子转录之后的翻译是怎样的？是从载体本身的第一个ATG开始，还是从每一个ATG都会各自翻译出一条蛋白
我现在希望它能从目的基因的开头那个ATG翻译出来一条，那前面那个CG是不是就不会引起后面的框移突变了？
谢谢各位了!!
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这个载体上面带有His标签，看你选择了，前后都有
你好，我想问的是蛋白翻译，跟his貌似没关系吧？
仔细看载体图谱。PET-28a如果要用Xho I做下游引物，一定要补齐你酶切时损失的那个碱基，不然就移码了。
请问一下原核表达是从启动子后面的第一个ATG开始往下延伸还是说每一个ATG开始都会各自翻译？
是从（NCOI酶）启动子后面的第一个ATG开始往下延伸，后面的ATG只会翻译成蛋氨酸。你的蛋白移码了，重新连吧。
感谢您的回答，再请问一下如果没有那2个碱基的话，翻译出的蛋白从NcoI到目的基因前面的这一段还需要我另外除掉吗
，
重做吧，前面有标签，肯定会移码的。