引物特异性怎么样？优化下退火温度试试。

你的marker也出现了问题，极大可能是你制作凝胶或电泳的缓冲液有问题。再就是，使用新鲜的agarose gel进行电泳，如果保存时间过长（即使是在4摄氏度下），胶体也会出现问题。建议重配缓冲液试一下，

同意楼上观点，你的marker也不清晰了。你试试把缓冲液都倒了，自己重新配置。然后胶现配现用。我一般用0.8%琼脂糖。